那么半定量就是，虽然我们不知道A和B表达的具体数值，但我们可以通过PCR的方式，在其他条件相同时，根据条带亮度判断A和B表达量高低，两两相比，亮的表达量就高，暗的表达量就低。当然，半定量不但可以比较不同基因表达量的高低，也可以比较相同基因在不同材料中表达量的高低。比如，想知道A基因是否受到盐胁迫的影...
以半定量RT-PCR为基础建立起来的mRNA含量测定技术,较含内标化的RT-PCR定量测定的mRNA的方法更为简便可行。这种方法不另设‘内标准',排除了俩对不同引物之间的相互抑制和灵敏读差异,而且具有明显的剂量-效益关系和良好的重复性。步骤:1.抽提RNA,2.反转录获得cDNA,3.以cDNA为模板做PCR 注意:步骤1,RNA抽提质量...
半定量RT-PCR技术通常是在无法进行实时PCR分析时的一种替代方案。它主要用于评估目标基因在生物体内的表达水平变化，即通过比较目标基因的电泳条带与管家基因（例如β-actin）的电泳条带相对强度，来判断目标基因的表达量是否有所增减。为了确保准确性，通常需要同时检测一个管家基因作为内部对照。管家基因是...
解析 半定量RT-PCR一般是在没有条件做 实时PCR 的情况下使用,用于测定体内目的基因的表达增加减少与否,即通过目的基因跑出来的电泳带与管家基因(如β-actin)的电泳带的相对含量比较,观测目的基因表达增减,另外还要做一...结果一 题目 什么是半定量 RT- PCR 答案 半定量RT-PCR一般是在没有条件做 实时PCR 的...
半定量RT-PCR在基因表达水平很高的时候，PCR体系可能在反应中后期就饱和了，所以对于高水平表达的基因来说，半定量RT-PCR可能不能准确反映问题。半定量RT-PCR有两种做法：一种是将要比较的两个样品的β-actin调成一样的亮度，然后直接比较目的基因的亮度；另一种是不进行调平，一个样品里将目的基因和...
在半定量RT - PCR里,我们通过比较不同样本里目标基因的扩增产物的量,来判断这个基因在不同情况下的表达水平是高了还是低了。比如说,我们想知道一种植物在干旱环境和湿润环境下某个基因的表达差异。我们就分别从干旱环境下的植物和湿润环境下的植物细胞里提取RNA,然后进行RT - PCR。如果干旱环境下植物的这个基因...
半定量RT-PCR试验心得 半定量RT-PCR小结 （一）试验原理 半定量PCR是用于确定目的基因mRNA表达的量，通常以一个管家基因作为参照，传统的方法是将RNA逆转录获得cDNA，然后使用等量的cDNA作为PCR模板，用特异引物进行扩增得到目的基因和管家基因的片段，由于不同组织或细胞等来源的目的基因表达量不同，在同一个PCR体系...
RT-PCR将以RNA为模板的cDNA合成同PCR结合在一起,提供了一种分析基因表达的快速灵敏的方法。RT-PCR用于对表达信息进行检测或定量。另外,这项技术还可以用来检测基因表达差异或不必构建cDNA文库克隆cDNA。RT-PCR比其他包括Northern印迹、RNase保护分析、原位杂交及S1核酸酶分析在内的RNA分析技术,更灵敏,更易于操作。
半定量RT-PCR的实验原理和方法步骤 以下实验步骤仅供参考: 1 样品RNA的抽提 ①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。 ②两相分离每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚...