在半定量RT - PCR里,我们通过比较不同样本里目标基因的扩增产物的量,来判断这个基因在不同情况下的表达水平是高了还是低了。比如说,我们想知道一种植物在干旱环境和湿润环境下某个基因的表达差异。我们就分别从干旱环境下的植物和湿润环境下的植物细胞里提取RNA,然后进行RT - PCR。如果干旱环境下植物的这个基因...
半定量RT-PCR小结 （一）试验原理 半定量PCR是用于确定目的基因mRNA表达的量，通常以一个管家基因作为参照，传统的方法是将RNA逆转录获得cDNA，然后使用等量的cDNA作为PCR模板，用特异引物进行扩增得到目的基因和管家基因的片段，由于不同组织或细胞等来源的目的基因表达量不同，在同一个PCR体系条件下扩增得到的产物不...
半定量RT-PCR的实验原理和方法步骤 以下实验步骤仅供参考: 1 样品RNA的抽提 ①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。 ②两相分离每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚...
RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。 由一条RNA单链转录为互补DNA(cDNA)称作“逆转录”,由依赖RNA的DNA 聚合酶(逆转录酶)来完成。随后,DNA的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖RNA 的DNA聚合酶完成,随每个循环倍增...
1、半定量逆转录聚合酶链反应的实验原理和方法步骤以下实验步骤仅供参考:1样品核糖核酸的提取取冷冻溶解的细胞,在室温下放置5分钟,使其完全溶解。(2)两相分离将0.2毫升氯仿加入到用1毫升TRIZOL试剂溶解的样品中,并将管盖紧紧地关闭。手动用力摇动试管15秒后,在15至30孵育。持续2到3分钟。在4下以12000转/分钟的...
RT-PCR 半定量RT-PCR简介 半定量RT-PCR流程 1.提取组织总RNA 2.合成反转录cDNA第一链 3.优化PCR反应体系 4.凝胶电泳及凝胶成像和定量分析 半定量RT-PCR应用 .RT-PCR 半定量反转录-聚合酶链反应(SqRT-PCR) semi-quantitativereversetranscriptionand polymeraseChainreaction 原理:通过mRNA反转录成cDNA,再进行PCR扩...
使用RT-PCR半定量,那么首先您需要多重复几次(最少3次),然后将目的基因和内对照的比值以均值+/-标准差的形式记录下来;其次要看您的实验设计了,象foliage兄探讨一个酶在病理情况下的表达变化,如果是3种不同的病理情况,则每个病理情况下都需要做至少3次RT-PCR,记录目的基因和内对照的比值,采用方差分析法(多半是正...
1原理 半定量RT-PCR技术的核心即PCR,是20世纪80年代末出现的一种相对定量的技术。当人们欲利用该技术研究并揭示某一基因的表达产物量的改变时,利用相同量的RNA进行反转录后,再PCR扩增,然后将扩增产物进行电泳判断量的差异。为避免样本间模板质量和扩增效率的差异而导致最终结果的差异,在PCR反应体系中引入了内对照系...
半定量RT-PCR检测细胞因子表达的研究 目的:建立一种客观,敏感的检测IL-2/IL-4细胞因子基因表达变化的方法.方法:采用TRIzol试剂提取免疫排斥/免疫耐受大鼠脾脏组织总RNA,分光光度计法定量.取2μg总RNA,采用... 林仁勇,丁剑冰,温浩,... - 《新疆医科大学学报》 被引量: 0发表: 2003年 ...