在半定量RT - PCR里,我们通过比较不同样本里目标基因的扩增产物的量,来判断这个基因在不同情况下的表达水平是高了还是低了。比如说,我们想知道一种植物在干旱环境和湿润环境下某个基因的表达差异。我们就分别从干旱环境下的植物和湿润环境下的植物细胞里提取RNA,然后进行RT - PCR。如果干旱环境下植物的这个基因...
半定量RT-PCR小结 （一）试验原理 半定量PCR是用于确定目的基因mRNA表达的量，通常以一个管家基因作为参照，传统的方法是将RNA逆转录获得cDNA，然后使用等量的cDNA作为PCR模板，用特异引物进行扩增得到目的基因和管家基因的片段，由于不同组织或细胞等来源的目的基因表达量不同，在同一个PCR体系条件下扩增得到的产物不...
RT-PCRRT-PCRRT-PCR 以下实验步骤仅供参考:以下实验步骤仅供参考:以下实验步骤仅供参考: 1 1 1 RNARNARNA ①取冻存已裂解的细胞,室温放置①取冻存已裂解的细胞,室温放置①取冻存已裂解的细胞,室温放置555分钟使其完全溶解。分钟使其完全溶解。分钟使其完全溶解。
1、半定量逆转录聚合酶链反应的实验原理和方法步骤以下实验步骤仅供参考:1样品核糖核酸的提取取冷冻溶解的细胞,在室温下放置5分钟,使其完全溶解。(2)两相分离将0.2毫升氯仿加入到用1毫升TRIZOL试剂溶解的样品中,并将管盖紧紧地关闭。手动用力摇动试管15秒后,在15至30孵育。持续2到3分钟。在4下以12000转/分钟的...
半定量RT-PCR检测细胞因子表达的研究 目的:建立一种客观,敏感的检测IL-2/IL-4细胞因子基因表达变化的方法.方法:采用TRIzol试剂提取免疫排斥/免疫耐受大鼠脾脏组织总RNA,分光光度计法定量.取2μg总RNA,采用... 林仁勇,丁剑冰,温浩,... - 《新疆医科大学学报》 被引量: 0发表: 2003年 ...
半定量RT-PCR的实验原理和方法步骤 以下实验步骤仅供参考: 1 样品RNA的抽提 ①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。 ②两相分离每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚...
RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。 由一条RNA单链转录为互补DNA(cDNA)称作“逆转录”,由依赖RNA的DNA 聚合酶(逆转录酶)来完成。随后,DNA的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖RNA 的DNA聚合酶完成,随每个循环倍增...
PCR也是如此,不要等到了平台期,那误差就太大了。 因为到了平台期,PCR产物的量和初始模板的量不成正比例相关。 在平台期模板多10倍,产物应该差不多, 随手画个自然曲线,马上就明白了。 之所以要分管作,就是保持这个自然曲线的”自然性“, 在同管竞争的条件下,自然曲线的形状都不能保证, ...
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