除RIP和RNA pull Down以外，凝胶迁移或电泳迁移率检测(Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMSA)，也称为凝胶阻滞实验或DNA结合实验，是一种广泛应用于分子生物学的研究技术，也可以用于研究蛋白质（尤其是转录因子）与DNA或RNA之间的相互作用。基本原理 EMSA的基本原理是利用凝胶电泳技术来观察蛋白质与DNA或RNA形成...
RNA可以是mRNA、非编码RNA(如circRNA、lncRNA、miRNA等)。RIP技术依赖于抗体特异性识别和RNA与蛋白质之间的物理交互作用。📌 RNA pull-down技术 RNA pull-down是一种检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的重要实验手段。通过体外转录法标记生物素RNA探针,与胞浆蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与...
RNA Pull-down和RNA免疫沉淀（RNA Immunoprecipitation， RIP）是研究RNA和蛋白互作的主流技术。RNA Pull-down更倾向于通过目标RNA（已知的RNA）去找到相互作用的未知蛋白，而RIP技术则更多应用于通过目标蛋白（已知蛋白）去找到相互作用的未知RNA。技术原理 RNA Pull-down用于研究RNA与蛋白质之间的相互作用。这项技术在...
RIP、RNA pull-down和MeRIP等实验技术是我们深入研究RNA和蛋白质相互作用的关键工具。RIP用于选择性地富集与特定RNA相互作用的蛋白质,RNA pull-down通过RNA探针捕获相互作用蛋白质,而MeRIP则用于甲基化RNA的研究。下面就让我们详细了解一下—— RIP RIP,全称为RNA Binding Protein ImmunoprecipitationAssay,RNA 结合蛋白免...
随后利用RNA Pull-Down技术鉴定与ELENA1结合的中介体亚基,结果显示MED19a与MED26b均能在体外与ELENA1 RNA结合,同时利用elf18处理MED19a/MED26b敲除株,发现只有MED19a敲除株中PR1表达情况显示出与ELENA1敲除株系相似的趋势。进一步利用GFP标记法、TriFC、RIP实验证明中介体亚基MED19a与ELENA1在体内也存在相互作用。以上...
随后利用RNA Pull-Down技术鉴定与ELENA1结合的中介体亚基,结果显示MED19a与MED26b均能在体外与ELENA1 RNA结合,同时利用elf18处理MED19a/MED26b敲除株,发现只有MED19a敲除株中PR1表达情况显示出与ELENA1敲除株系相似的趋势。进一步利用GFP标记法、TriFC、RIP实验证明中介体亚基MED19a与ELENA1在体内也存在相互作用。以上...
要想进行深层次的挖掘，可以研究其作用机制，RNA pull down、RIP、双荧光素酶等实验技术，检测与目标RNA相互作用的蛋白质或RNA，进一步揭示RNA的生物学功能。然后在动物或细胞模型中验证RNA的功能和调控机制，进一步确认其在生理和病理条件下的重要性。图2 LncRNA研究思路 深入了解LncRNA作用机制能够帮助我们识别疾病的...
近年来,以长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)和环状RNA(circular RNA,circRNA)为中心连同miRNA被发现具有广泛的生物学功能,逐渐成为生物医学领域的研究热点,而RIP-seq与RNA pull down是非编码RNA与蛋白研究中最常用到的两种分子互作技术。小编将逐一对这两种技术进行介绍。
区别在于RIP是从蛋白出发研究蛋白-RNA相互作用的技术,是已知一个蛋白,分析与其互作的RNA;而RNA pulldown是从RNA出发研究蛋白-RNA相互作用,是已知一个RNA,分析与其互作的蛋白。 简单来说,RNA pulldown和RIP,前者是已知RNA拉蛋白,后者是已知蛋白去拉RNA。
RNA pull-down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验手段之一。RNA pull-down使用体外转录法标记生物素RNA探针,然后与胞浆蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链亲和素标记的磁珠结合,从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后,通过Western Blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与RNA相互作...