Pull down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用关系,从体外转录或翻译体系中检测出蛋白相互作用关系。RNA pull-down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验手段之一。RNA pull down是使用体外转录法标记生物素RNA探针,然...
图4 我司RNA Pull-down案例展示：（A）体外转录法电泳检测图（阳性），左图：PCR扩增DNA的电泳；右图：体外转录标记RNA的电泳；（B）RNA Pull-down的银染结果；（C）MS差异蛋白鉴定及KEGG分析。伯远医学拥有一流的技术团队、丰富的项目经验，提供专业RNA Pull-down技术服务，适用于RNA与蛋白结合的领域研究，欢迎大...
RNA Pull-down技术实验流程主要包括以下几个步骤: (1)构建含目的基因序列质粒:选择自己感兴趣的基因,根据其序列用同源重组方式或全基因合成构建含目的基因序列质粒;并测序验证序列准确性,并提取含目的基因序列质粒备用; (2)转录模板的获取:T7 RNA聚合酶特异性识别来自T7噬菌体的启动子序列。为了使T7 RNA聚合酶能够...
RNA Pull down（RNA下拉）是一种生物实验技术，被广泛应用于研究RNA与蛋白质之间的相互作用以及寻找可能的未知RNA结合蛋白。以下是对RNA Pull down技术的详细介绍：一、基本原理 RNA Pull down技术利用带标签的RNA探针与目标蛋白质进行体外或体内结合，然后通过亲和分离或免疫共沉淀等方法将结合的复合物分离出来，最后对...
RNA-Pull down实验详细操作方法步骤: 一、细胞收集(对于单层细胞或贴壁细胞) 准备细胞5E7细胞。 用10 mL冰冷的PBS洗涤培养瓶或平板上的细胞两次。 加入10 mL冰冷的PBS。从每个培养瓶或平板上刮下细胞,然后转移到离心管。 通过在4°C下以1500 rpm离心5 min来收集细胞,并丢弃上清液。细胞沉淀-80℃保存。
嘿,大家好!今天我们来聊聊RNA Pull down实验,这可是个挺有意思的实验哦!不过,这个实验步骤有点多,咱们一步一步来,慢慢搞定。 RNA提取 🧬 首先,咱们得提取RNA。这个步骤其实还挺关键的,毕竟RNA这东西很脆弱,稍微不注意就搞砸了。具体操作如下: 准备样品:把你的Input样品、sense、antisense和beads分别放进1ml的...
RNA pull down-实验简介 RNA pull down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验方法之一。使⽤体外转录法标记⽣物素RNA探针，然后与胞浆蛋⽩提取液孵育，形成RNA-蛋⽩质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合，从⽽与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后，通过WB 实验检测特定的RNA ...
标记RNA:使用 T4 RNA Ligase 将生物素标记到 RNA 的 3’端。 捕获标记 RNA:利用 streptavidin 磁珠捕获标记的 RNA。 结合蛋白质:将蛋白质与 RNA 结合。 洗脱:洗脱结合的蛋白质。 检测:通过 Western blotting 或质谱分析检测结合的蛋白质。通过以上步骤,你可以成功进行 RNA pull down 实验,深入了解 RNA 与蛋白...
1)选择合适的亲和分离介质:根据实验需求选择合适的磁珠或色谱柱等亲和分离介质。例如,可以使用 streptavidin beads 进行生物素标记的RNA pull down实验,或使用 Ni Sepharose或者 GST beads 进行含有His/GST标签的蛋白质的亲和分离。(相关好物可在最下方查看) ...
RNA-Pull down实验详细操作方法步骤: 一、细胞收集(对于单层细胞或贴壁细胞) 准备细胞5E7细胞。 用10 mL冰冷的PBS洗涤培养瓶或平板上的细胞两次。 加入10 mL冰冷的PBS。从每个培养瓶或平板上刮下细胞,然后转移到离心管。 通过在4°C下以1500 rpm离心5 min来收集细胞,并丢弃上清液。细胞沉淀-80℃保存。