1、实验前期准备 (1)首先是样本的收集和处理,如果样本是细胞,要考虑细胞中该RNA的表达量,如果RNA含量较低,那提取出来的RBP可想而知会非常少, 建议大家提前准备较多的细胞。( 本人的试剂盒要求的量是107个细胞,实验操作时使用了8个10 cm大皿。)也看到很多小伙伴说可以先进行过表达该RNA后再进行pull-down实验,...
1、 实验简介 RNA pull down是用于检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间互作的实验手段。RNA pull down使用体外转录法标记生物素RNA探针,然后与胞浆蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链亲和素标记的磁珠结合,从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后,通过Western Blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与RN...
rnapulldown实验还需要注重实验过程中对质量和污染的控制，例如：对RNA Probe、anti、实验器具等进行无菌处理，避免杂质干扰实验结果。此外，实验过程中的各项条件和步骤也需精准控制，以确保实验结果的可重复性和准确性。
总之,针对RNA Pull Down实验中可能出现的问题,需要仔细分析并采取相应的措施进行解决。同时,在实验过程中注意规范操作,提高实验的可重复性和可靠性。 小优推荐: QIAGEN基于锁核酸(Locked Nucleic Acid,LNA)技术,针对几乎所有已知miRNA设计了一系列成熟的miRCURY LNA miRNA Detection Probes,为更加灵敏、高效的完成miRNA的...
四、实验注意事项 1. 确保重组载体在细胞内成功表达。 2. 确保总RNA的质量和纯度。 3. 确保荧光标记的RNA分子与总RNA混合均匀。 4. 确保含有荧光标记的蛋白复合物充分吸附到特定位点。 5. 在进行质谱分析时,注意选择合适的蛋白质鉴定方法和技术。 总之,体外RNA pull down技术是一种非常有效的研究蛋白质与RNA相...
DNA pull-down实验怎么做?手把手教你学会蛋白质与DNA互作实验! 6690 5 8:46 App 研究非编码RNA必备神器之一:starbase使用讲解 3786 1 4:48 App 详细实验操作步骤:探针法RNA pull-down,这样做! 1809 1 13:52 App 基因合成之连接转化(上) 6231 3 4:06 App 015. 男性太常做愛小心腎虧? 4969 20 50:...
1、RNA pull down 实验技术流程目标RNA生物素标记磁珠富集RNARNA结合蛋白孵育RNA结合蛋白洗脱WB或者MS检测 RNA pull- down实验常见问题一. 质粒转化、涂板、摇菌1. 取JM109感受态细菌80µl,加入1.5mlEP管中,用10µl枪头沾取质粒加入上述EP管中,混匀。2. 冰上静置30min。3. 42热休克90-120s。4. 迅速...
4.3优势及注意事项 RNA pulldown:快速省时,实验只需3h;操作简单,容易上手。体外实验,结合蛋白富集率高,非特异结合风险也较高,质谱建议同时做实验组和阴性对照组,以排除非特异结合蛋白。 RAP:灵敏度较高,稳定性好;结果准确、重复性好。主要研究对象为lncRNA、mRNA或circRNA,内源目的RNA表达量最好△Ct值<12,以降...
RNA Pull-down技术实验流程主要包括以下几个步骤：（1）构建含目的基因序列质粒：选择自己感兴趣的基因，根据其序列用同源重组方式或全基因合成构建含目的基因序列质粒；并测序验证序列准确性，并提取含目的基因序列质粒备用；（2）转录模板的获取：T7 RNA聚合酶特异性识别来自T7噬菌体的启动子序列。为了使T7 RNA聚合...
RNA pull down-实验简介 RNA pull down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验方法之一。使⽤体外转录法标记⽣物素RNA探针，然后与胞浆蛋⽩提取液孵育，形成RNA-蛋⽩质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合，从⽽与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后，通过WB 实验检测特定的RNA ...