1、实验前期准备 (1)首先是样本的收集和处理,如果样本是细胞,要考虑细胞中该RNA的表达量,如果RNA含量较低,那提取出来的RBP可想而知会非常少, 建议大家提前准备较多的细胞。( 本人的试剂盒要求的量是107个细胞,实验操作时使用了8个10 cm大皿。)也看到很多小伙伴说可以先进行过表达该RNA后再进行pull-down实验,...
1、 实验简介 RNA pull down是用于检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间互作的实验手段。RNA pull down使用体外转录法标记生物素RNA探针,然后与胞浆蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链亲和素标记的磁珠结合,从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后,通过Western Blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与RN...
总之,针对RNA Pull Down实验中可能出现的问题,需要仔细分析并采取相应的措施进行解决。同时,在实验过程中注意规范操作,提高实验的可重复性和可靠性。 小优推荐: QIAGEN基于锁核酸(Locked Nucleic Acid,LNA)技术,针对几乎所有已知miRNA设计了一系列成熟的miRCURY LNA miRNA Detection Probes,为更加灵敏、高效的完成miRNA的...
rnapulldown实验还需要注重实验过程中对质量和污染的控制，例如：对RNA Probe、anti、实验器具等进行无菌处理，避免杂质干扰实验结果。此外，实验过程中的各项条件和步骤也需精准控制，以确保实验结果的可重复性和准确性。
四、实验注意事项 1. 确保重组载体在细胞内成功表达。 2. 确保总RNA的质量和纯度。 3. 确保荧光标记的RNA分子与总RNA混合均匀。 4. 确保含有荧光标记的蛋白复合物充分吸附到特定位点。 5. 在进行质谱分析时,注意选择合适的蛋白质鉴定方法和技术。 总之,体外RNA pull down技术是一种非常有效的研究蛋白质与RNA相...
DNA pull-down实验怎么做?手把手教你学会蛋白质与DNA互作实验! 6690 5 8:46 App 研究非编码RNA必备神器之一:starbase使用讲解 3786 1 4:48 App 详细实验操作步骤:探针法RNA pull-down,这样做! 1809 1 13:52 App 基因合成之连接转化(上) 6231 3 4:06 App 015. 男性太常做愛小心腎虧? 4969 20 50:...
RNA Pull-down技术实验流程主要包括以下几个步骤：（1）构建含目的基因序列质粒：选择自己感兴趣的基因，根据其序列用同源重组方式或全基因合成构建含目的基因序列质粒；并测序验证序列准确性，并提取含目的基因序列质粒备用；（2）转录模板的获取：T7 RNA聚合酶特异性识别来自T7噬菌体的启动子序列。为了使T7 RNA聚合...
RNA pull down-实验简介 RNA pull down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验方法之一。使⽤体外转录法标记⽣物素RNA探针，然后与胞浆蛋⽩提取液孵育，形成RNA-蛋⽩质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合，从⽽与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后，通过WB 实验检测特定的RNA ...
RNA pull- down实验常见问题 RNA结合蛋白的亲和力不够 可能的原因：1)结合缓冲环境没有优化；2)裂解不完全；3)磁珠用量不足；4) RNA探针用量不足解决方案：1)优化孵育时间、温度、盐浓度等条件；2)增加裂解液和蛋白上样量的比例；3)增加裂解液；4)增加磁珠或探针用量；5)确定生物素和涟霉亲和素效率 RNA...
RNA pull down属于前者,通过体外转录的方式将感兴趣的RNA带上标签,通过该标签使RNA结合到树脂支持物上,再加入样本蛋白质与RNA结合,洗涤、洗脱得到与目标RNA结合的蛋白质。 原理: Pull down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用...