1. RNA pull-down技术原理 RNA pull down技术是一个非常经典的以RNA为研究对象,寻求互作蛋白的技术。其技术原理是,体外转录或化学合成获取目标RNA,对RNA末端进行生物素标记制备探针,而后将标记生物素的RNA与蛋白裂解液进行孵育,获取探针-蛋白复合物,而后利用链霉亲和素磁珠结合探针-蛋白复合物,洗脱非特异性蛋白后,we...
RNApull-down是研究细胞内RNA与蛋⽩/RNA结合情况的技术。先将RNA进⾏标记 (如⽣物素标记),再与细胞裂解液共同孵育,从⽽形成RNA-RNA/蛋⽩质复合物,进 ⽽检测与之结合的RNA或蛋⽩质。复合物洗脱后,通过荧光定量PCR(RNA pull down- QPCR)或⾼通量测序(RNApull down-seq)⽅法来鉴定⽬标RNA是否...
Pull down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用关系,从体外转录或翻译体系中检测出蛋白相互作用关系。RNA pull-down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验手段之一。RNA pull down是使用体外转录法标记生物素RNA探针,然...
RNA pull down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验方法之一。使⽤体外转录法标记⽣物素RNA探针，然后与胞浆蛋⽩提取液孵育，形成RNA-蛋⽩质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合，从⽽与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后，通过WB 实验检测特定的RNA 结合蛋⽩是否与RNA 相互作...
图2 RNA Pull-down实验流程图（Panda et al., 2016）。RNA Pull-down技术实验流程主要包括以下几个步骤：（1）构建含目的基因序列质粒：选择自己感兴趣的基因，根据其序列用同源重组方式或全基因合成构建含目的基因序列质粒；并测序验证序列准确性，并提取含目的基因序列质粒备用；（2）转录模板的获取：T7 RNA聚合...
RNA pull-down RNA pull-down是研究细胞内RNA与蛋白/RNA结合情况的技术。先将RNA进行标记（如生物素标记），再与细胞裂解液共同孵育，从而形成RNA-RNA/蛋白质复合物，进而检测与之结合的RNA或蛋白质。复合物洗脱后，通过荧光定量PCR(RNA pull down-QPCR)或高通量测序(RNA pull down-seq)方法来鉴定目标RNN是否与...
一、RNA pull-down的原理 RNA pull-down技术的原理基于RNA的序列与蛋白质的互补性。在实验中,我们通常使用目标RNA序列(也称为“诱饵RNA”)的互补RNA链或合成肽核苷酸。通过这种互补性,诱饵RNA能够特异性地结合目标蛋白质。 二、RNApull-down的步骤 1.设计和合成诱饵RNA 在RNA pull-down实验中,首先需要设计和合成...
一、RNA Pull Down技术概述 RNA Pull Down技术是一种研究RNA与蛋白质之间相互作用的技术。它通常利用带标签的RNA探针与目标蛋白质进行体外或体内结合,然后通过亲和分离或免疫共沉淀等方法将结合的复合物分离出来,最后对分离出来的复合物进行检测和分析。该技术的优点在于可以快速、有效地筛选和鉴定与特定RNA结合的蛋白质...
RNA pull-down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验手段之一。RNA pull-down使用体外转录法标记生物素RNA探针,然后与胞浆蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链亲和素标记的磁珠结合,从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后,通...
RNA pull-down用于检测RNA-蛋白质、或RNA-RNA之间相互作用的技术,其基本原理是:利用带标签的目标RNA探针与待测蛋白质或RNA进行体外或体内结合,通过亲和作用将复合物分离出来,之后采用Western Blot、质谱技术检测结合蛋白,或采用qPCR、测序技术检测结合RNA。