通过这些应用,RNA pull-down技术为研究RNA功能和RNA与其它分子之间的复杂相互作用提供了有力的工具,推动了基础研究和临床研究的进展。 4. RNA pull-down的操作流程 4.1 样本裂解 4.1.1 细胞样本 裂解液准备:取990μL的IP Lysis Buffer,加入10μL Protease Inhibitor(100X),混匀。 细胞收集与洗涤:收集2×10^7...
但由于RBPs作用方式复杂,功能多样性,作用空间位置多样化等原因,对其开展精确的研究一直是一个重大挑战。RNA领域,尤其是非编码RNA研究的快速发展,催生了多种RBPs–RNAs互相作用鉴定技术。 二.RNA pull down实验内容 使用体外转录法标记生物素RNA探针,然后与胞浆蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉...
Pull down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用关系,从体外转录或翻译体系中检测出蛋白相互作用关系。RNA pull-down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验手段之一。RNA pull down是使用体外转录法标记生物素RNA探针,然...
RNA-蛋白互作之RNA pull down RNA pull down-实验简介 RNA pull down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验方法之一。使⽤体外转录法标记⽣物素RNA探针，然后与胞浆蛋⽩提取液孵育，形成RNA-蛋⽩质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合，从⽽与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后...
RNA pull down技术应用癌症肿瘤相关调控机制研究 LncRNA发挥功能的方式很广,可以与蛋白、DNA和RNA相互作用,参与多种生物学过程的调控。主要包括基因组表观遗传修饰、调控转录后翻译、发挥ceRNA、增强子RNA作用等,从而对细胞的增殖、分化、迁移、凋亡、免疫等发挥调控作用。 lncRNA能够通过对肿瘤细胞糖代谢、谷氨酰胺代谢...
随后利用RNA Pull-Down技术鉴定与ELENA1结合的中介体亚基,结果显示MED19a与MED26b均能在体外与ELENA1 RNA结合,同时利用elf18处理MED19a/MED26b敲除株,发现只有MED19a敲除株中PR1表达情况显示出与ELENA1敲除株系相似的趋势。进一步利用GFP标记法、TriFC、RIP实验证明中介体亚基MED19a与ELENA1在体内也存在相互作用。以上...
除RIP和RNA pull Down以外，凝胶迁移或电泳迁移率检测(Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMSA)，也称为凝胶阻滞实验或DNA结合实验，是一种广泛应用于分子生物学的研究技术，也可以用于研究蛋白质（尤其是转录因子）与DNA或RNA之间的相互作用。基本原理 EMSA的基本原理是利用凝胶电泳技术来观察蛋白质与DNA或RNA形成...
RNA-Pull d..一、细胞收集(对于单层细胞或贴壁细胞)1. 准备细胞5E7细胞。2. 用10 mL冰冷的PBS洗涤培养瓶或平板上的细胞两次。3. 加入10 mL冰冷的PBS。从每个培养瓶或平板上刮下细胞,然后转移到离
另一类是找到与感兴趣的蛋白结合的RNA,如RIP、CLIP等。其中RNApulldown是检测RNA结合蛋白与其靶RNA相互作用的主要技术之一,是近年来研究lncRNA、circRNA与蛋白质相互作用的主要手段。 1.RNApulldown原理与应用 1.1 RNApulldown的技术原理: RNA pulldown技术为研究RNA和蛋白质相互作用的核心技术,该技术利用生物素标记的...