RNA Pull down（RNA下拉）是一种生物实验技术，被广泛应用于研究RNA与蛋白质之间的相互作用以及寻找可能的未知RNA结合蛋白。以下是对RNA Pull down技术的详细介绍：一、基本原理 RNA Pull down技术利用带标签的RNA探针与目标蛋白质进行体外或体内结合，然后通过亲和分离或免疫共沉淀等方法将结合的复合物分离出来，最后对...
所以pull-down实验一般是体外转录得到目的RNA。 5、RNA在转录出来后,其OD一般都不高,可以使用吗?咋定量呢? 一般会进行电泳检测(DNA电泳方式一样),可以根据marker浓度来判断RNA的浓度。Pull-down实验不需要精确的定量,都会加入过量的探针。 6、关于样本处理:细胞裂解物裂解的时候要不要加蛋白酶抑制剂还有RNA酶抑制剂...
RNA Pull Down技术是一种研究RNA与蛋白质之间相互作用的技术。它通常利用带标签的RNA探针与目标蛋白质进行体外或体内结合,然后通过亲和分离或免疫共沉淀等方法将结合的复合物分离出来,最后对分离出来的复合物进行检测和分析。该技术的优点在于可以快速、有效地筛选和鉴定与特定RNA结合的蛋白质,同时也可以检测和分析RNA的...
Pull down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用关系,从体外转录或翻译体系中检测出蛋白相互作用关系。RNA pull-down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验手段之一。RNA pull down是使用体外转录法标记生物素RNA探针,然...
通过这些应用,RNA pull-down技术为研究RNA功能和RNA与其它分子之间的复杂相互作用提供了有力的工具,推动了基础研究和临床研究的进展。 4. RNA pull-down的操作流程 4.1 样本裂解 4.1.1 细胞样本 裂解液准备:取990μL的IP Lysis Buffer,加入10μL Protease Inhibitor(100X),混匀。 细胞收集与洗涤:收集2×10^7...
RNA pull-down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验手段之一。RNA pull-down使用体外转录法标记生物素RNA探针,然后与胞浆蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链亲和素标记的磁珠结合,从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后,通...
RNA pull down技术是一个非常经典的以RNA为研究对象,寻求互作蛋白的技术。其技术原理是,体外转录或化学合成获取目标RNA,对RNA末端进行生物素标记制备探针,而后将标记生物素的RNA与蛋白裂解液进行孵育,获取探针-蛋白复合物,而后利用链霉亲和素磁珠结合探针-蛋白复合物,洗脱非特异性蛋白后,western-blot检测特定蛋白或者质...
本次实验的目的是使用RNA-Pull down-MS或者RNA-Pull down-WB的方法,通过体外转录法标记生物素RNA探针,在目的细胞中通过目的探针把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,经过分离纯化并对结合在复合物上的蛋白进行MS或WB分析,寻找目的RNA的靶标蛋白,或在不同遗传背景或处理条件下的互作变化。广州基云生物拥有资深的项目管理...
一.RNA pull down 技术应用 1.癌症肿瘤相关调控机制研究 LncRNA发挥功能的方式很广,可以与蛋白、DNA和RNA相互作用,参与多种生物学过程的调控,主要包括基因组表观遗传修饰、调控转录翻译、发挥ceRNA、增强子RNA作用等,从而对细胞增值、分化、迁移、凋亡、免疫等发挥调控作用。