RNA Pull down（RNA下拉）是一种生物实验技术，被广泛应用于研究RNA与蛋白质之间的相互作用以及寻找可能的未知RNA结合蛋白。以下是对RNA Pull down技术的详细介绍：一、基本原理 RNA Pull down技术利用带标签的RNA探针与目标蛋白质进行体外或体内结合，然后通过亲和分离或免疫共沉淀等方法将结合的复合物分离出来，最后对...
详细实验操作步骤:探针法RNA pull-down,这样做!, 视频播放量 4206、弹幕量 1、点赞数 76、投硬币枚数 11、收藏人数 232、转发人数 37, 视频作者 金开瑞生物, 作者简介 生物相关干货分享~技术实验、知识科普,应有尽有~,相关视频:解析|关于RNA pull down 看完这个视频就
以此为模板,设计带有T7启动子(TAATACGACTCACTATAGGG)的引物,PCR分别获得T7-正义链(实验组)和T7-反义链(对照组)DNA模板并回收纯化。 2. 体外转录得到标记的RNA探针。以带有T7启动子的DNA为模板,采用体外转录试剂盒进行转录,生成RNA。为了进行后续RNA pull down实验,同时对RNA进行标记。 RNA pull down实验常常...
1. RNA pull-down技术原理 RNA pull down技术是一个非常经典的以RNA为研究对象,寻求互作蛋白的技术。其技术原理是,体外转录或化学合成获取目标RNA,对RNA末端进行生物素标记制备探针,而后将标记生物素的RNA与蛋白裂解液进行孵育,获取探针-蛋白复合物,而后利用链霉亲和素磁珠结合探针-蛋白复合物,洗脱非特异性蛋白后,we...
2.RNA pull-down一定要体外转录合成RNA探针吗不能基因合成吗? 一般我们认为的基因合成是合成DNA双链,体外转录只是获得RNA的一种方式,相比化学合成纯度更高。所以pull-down实验一般是体外转录得到目的RNA。 3.RNA在转录出来后,其OD一般都不高,可以使用吗?咋定量呢? 一般会进行电泳检测(DNA电泳方式一样),可以根据ma...
rna pull down流程rna pull down流程 RNA pull down流程:设计并合成标记的靶RNA探针;将探针与细胞裂解液孵育,使RNA与相互作用蛋白结合;利用标记物亲和纯化复合物;洗脱分离蛋白;通过WB、质谱等鉴定富集到的蛋白,揭示RNA-蛋白相互作用。©2022 Baidu |由 百度智能云 提供计算服务 | 使用百度前必读 | 文库协议 | ...
lncRNA研究策略之:RNA Pull Down实验技术 导语 RNA pull-down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验手段之一。RNA pull-down使用体外转录法标记生物素RNA探针,然后与胞浆蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链亲和素标记...
RNA pull down-实验简介 RNA pull down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验方法之一。使⽤体外转录法标记⽣物素RNA探针，然后与胞浆蛋⽩提取液孵育，形成RNA-蛋⽩质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合，从⽽与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后，通过WB 实验检测特定的RNA ...
RNA Pull down技术原理 RNA pull down实验的大致流程：1、探针制备 设计并合成含有T7启动子的特异性引物。使用含有目的基因的质粒作为模板进行PCR扩增。利用PCR产物作为模板进行体外转录，获得目的RNA。对目的RNA进行标记，通常使用生物素标记。2、细胞裂解液准备 收集细胞并裂解，制备细胞裂解液。通过离心去除细胞碎片，...
RNA pulldown的原理是用生物素标记RNA模拟目的RNA与蛋白直接孵育结合,这就要求探针序列要与目的RNA序列一致,用circRNA接头互补探针做RNA pulldown不符合实验原理。 实验操作上,首先用circRNA接头互补探针的目的是拉取内源circRNA,但此时孵育温度不确定,与RNA pulldown的孵育温度不相符,另外探针-磁珠复合物与细胞全蛋白孵...