自噬形成时，胞浆型LC3（即LC3-I）会酶解掉一小段多肽，转变为（自噬体）膜型（即LC3-II），因此可利用WB检测LC3-II/I比值的变化以评估自噬的强弱。此外自噬衔接物如sequestosome 1（SQSTM1，也称为p62）也可用于检测自噬，p62蛋白水平的多少与自噬强弱有着反比例关系。2.3荧光蛋白标记检测 2.3.1 GFP-LC3 ...
目前文献对自噬过程进行观察和检测常用的策略和手段有:通过western blot检测LC3的剪切;通过电镜观测自噬体的形成;在荧光显微镜下采用GFP(-RFP)-LC3等融合蛋白来示踪自噬体形成以及降解。近几年对自噬流的研究日趋增多,针对于此我们汉恒生物科技(上海)有限公司自主研发了用于实时监测自噬(流)的mRFP-GFP-LC3腺病毒,mRFP...
如下图:细胞转染mRFP-GFP-LC3病毒后给予氨基酸剥夺处理2小时后出现明显增强的自噬以及自噬流。 红色斑点是自噬溶酶体(mRFP),黄色斑点是自噬体(RFP+GFP). 通过不同颜色斑点的计数可以清晰看出自噬流的强弱,实时监测自噬发生过程,准确,清晰,直观! 参考文献
吉满助力使用pGMLV-GFP-LC3 慢病毒(Genomeditech Co., Ltd.)感染CMEC细胞，使用荧光显微镜观察经过DOX和Irisin处理的CMEC细胞发现(图O-R)，Irisin可以促进CMEC细胞自噬的形成，并且可以部分挽救CMEC细胞中因DOX造成的自噬紊乱。案例二：N6-methyladenosine modification regulates ferroptosis through autophagy signaling pathway...
自噬流目前常用的检测方法有GFP-LC3-RFP-LC3ΔG。GFP-LC3在自噬溶酶体中很不稳定，而RFP-LC3ΔG则仍可以留在细胞质中，同时观察两种荧光颜色，可以用于监测自噬通量。但是上述这种方法由于需要转染质粒，一方面实验操作麻烦，另一方面也在部分实验中备受限制。之后会为大家详细介绍一种无需转染的自噬流检测方法。通过...
图3激光共聚焦下观察RFP-GFP-LC3稳定细胞株中自噬体的形成 (A)2h血清饥饿后,RFP-GFP-LC3稳定细胞株中自噬体的形成图(标尺50μm);(B)图A中绿色荧光点/红色荧光点的统计结果。**:P<0.01,与对照组相比;#:P<0.05,与饥饿组相比。 Fig.3ObservationofautophagyformationinRFP-GFP-LC3stablecelllineunderlaserscann...
This probe is cleaved to produce GFP-LC3 and RFP-LC3螖G, the former of which is degraded by autophagy, and the latter of which is maintained in the cytoplasm to serve as an internal control. Autophagic activity can be simply and quantitatively estimated by determining the ratio of GFP and ...
无自噬时,RFP-GFP-hLC3融合蛋白弥散在胞浆中,在荧光显微镜下显示为黄色斑点;自噬形成时,由于自噬小体进入第二阶段后,与溶酶体进行融合,形成自噬溶酶体。自噬溶酶体由于溶酶体内部的酸性环境,可以导致PH下降,GFP淬灭,因此,GFP的减弱可指示自噬溶酶体形成的顺利程度,GFP越少,则从自噬小体到自噬溶酶体阶段流通得越...
GFP reached to 100%. The number of autophagic puncta significantly increased after starvationtreatment. Conclusion The RAW264.7 cell strain with stable expression of RFP-GFP-LC3 has been successfully constructed,which provides a reliable cellular platform for autophagy research.[Key words] autophagy;...
1、MBL-Autophagy Watch 试剂盒:http://www.ny-bio.com/cn/nd.jsp?id=623&id=623 2、MBL-线粒体自噬:http://www.ny-bio.com/cn/nd.jsp?id=624&id=624 3、MBL-LC3抗体自噬研究金标准:http://www.ny-bio.com/cn/nd.jsp?id=625&id=625 ...