细胞内表达的GFP-LC3-RFP-LC3ΔG融合蛋白经Atg4内肽酶加工，断裂成GFP-LC3和RFP-LC3ΔG，后者缺乏与膜结合所需的C末端甘氨酸。GFP-LC3和RFP-LC3ΔG分别充当自噬底物和内对照。GFP-LC3相对于RFP-LC3ΔG的比值与自噬强弱呈负相关。这种方法可以使用流式细胞仪或荧光酶标仪检测自噬。2.3.4 Keima Keima是一种独...
本研究使用GFP-RFP-LC3(Genomeditech Co., Ltd.)病毒感染K1细胞，通过共聚焦显微镜观察发现(图A)，1 μM Obatoclax处理K1细胞24h后，GFP-RFP-LC3阳性自噬斑点显著增加；TEM观察表明(图B)，Obatoclax处理后，K1细胞出现与溶酶体共定位的自噬囊泡形成，并且损伤的溶酶体或大泡明显增加，间接表明Obatoclax中和了溶...
pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG载体序列是一个大肠杆菌表达载体,Tac强启动子可以驱动GST促溶标签和目的基因融合表达,LacI阻碍蛋白和Laco操作子使本质粒在没有加入IPTG之前禁止表达,防止其影响细菌生长。表达后的融合蛋白可用凝血酶蛋白酶切割,再过一次GST柱子即可清除掉GST标签。 产品相册pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG...
目前文献对自噬过程进行观察和检测常用的策略和手段有:通过western blot检测LC3的剪切;通过电镜观测自噬体的形成;在荧光显微镜下采用GFP(-RFP)-LC3等融合蛋白来示踪自噬体形成以及降解。近几年对自噬流的研究日趋增多,针对于此我们汉恒生物科技(上海)有限公司自主研发了用于实时监测自噬(流)的mRFP-GFP-LC3腺病毒,mRFP...
自噬流目前常用的检测方法有GFP-LC3-RFP-LC3ΔG。GFP-LC3在自噬溶酶体中很不稳定，而RFP-LC3ΔG则仍可以留在细胞质中，同时观察两种荧光颜色，可以用于监测自噬通量。但是上述这种方法由于需要转染质粒，一方面实验操作麻烦，另一方面也在部分实验中备受限制。之后会为大家详细介绍一种无需转染的自噬流检测方法。通过...
P1333/pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG哺乳自噬质粒,质粒(plasmid)是细菌或细胞染色质以外的,能自主复制的,与细菌或细胞共生的遗传成,质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的质粒。 详细内容 公司简介 上海远慕生物专业供应抗生素、维生素、培养基、染色剂、酶/辅酶、碳水化合物、分离试剂、缓冲...
英文名称:pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG哺乳自噬质粒 保质期:3个月/12个月以上 保存条件:-20℃/-80℃ pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG哺乳自噬质粒信息 规格:2ug 保质期:3个月 保存温度:-20℃ 使用说明1、收到质粒干粉后请5000rpm离心1min,再加入20ul ddH2O溶解质粒 ...
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方法 构建含 RFP-GFP-LC3 基因的慢病毒重组质粒载体,将重组质粒与慢病毒包装质粒共转染 HEK293T 细胞,收集病毒上清后感染 RAW264. 7 细胞。经嘌呤霉素筛选获得稳定表达 RFP-GFP-LC3 的RAW264. 7 细胞株,用荧光显微镜和流式细胞术分析感染效率。饥饿处理稳定感染细胞,荧光显微镜下观察 RFP-GFP-LC3 斑点。结果 ...
如下图:细胞转染mRFP-GFP-LC3病毒后给予氨基酸剥夺处理2小时后出现明显增强的自噬以及自噬流。 红色斑点是自噬溶酶体(mRFP),黄色斑点是自噬体(RFP+GFP). 通过不同颜色斑点的计数可以清晰看出自噬流的强弱,实时监测自噬发生过程,准确,清晰,直观! 参考文献