rfp-gfp-lc3质粒原理 rfp-gfp-lc3质粒作为自噬研究领域的重要分子工具，其设计原理基于荧光蛋白标记与自噬体膜蛋白的融合表达机制。该质粒通过将红色荧光蛋白（rfp）、绿色荧光蛋白（gfp）与微管相关蛋白1轻链3（lc3）进行基因重组，构建成能够实时监测自噬流的双标记系统。质粒骨架通常包含以下核心元件：哺乳动物表达启动...
2.3.2 RFP-GFP-LC3 在GFP-LC3的基础上，研究人员开发了GFP-RFP-LC3工具，红色荧光蛋白（RFP）在酸性环境中信号稳定。报告基因发出红色和绿色的荧光，图像重合时，自噬体将显示黄光。然而，在自噬溶酶体的酸性环境中，GFP荧光迅速淬灭，只留下红色荧光信号。诱导自噬后，黄光（表示更多的自噬体）和红光（表示更多...
结论 成功建立稳定表达 RFP-GFP-LC3 的RAW264. 7 细胞株,为自噬研究建立了可靠细胞平台。[关键词] 自噬;慢病毒;RAW264. 7 细胞;稳定表达[中图分类号] R392. 12,Q344+. 13,R329. 2+ 5[文献标志码] AEstablishment of RAW264. 7 cell strain stably expressing RFP-GFP-LC3WANG Wan 1 ,ZHANG Qing ...
目前文献对自噬过程进行观察和检测常用的策略和手段有:通过western blot检测LC3的剪切;通过电镜观测自噬体的形成;在荧光显微镜下采用GFP(-RFP)-LC3等融合蛋白来示踪自噬体形成以及降解。近几年对自噬流的研究日趋增多,针对于此我们汉恒生物科技(上海)有限公司自主研发了用于实时监测自噬(流)的mRFP-GFP-LC3腺病毒,mRFP...
本研究使用GFP-RFP-LC3(Genomeditech Co., Ltd.)病毒感染K1细胞，通过共聚焦显微镜观察发现(图A)，1 μM Obatoclax处理K1细胞24h后，GFP-RFP-LC3阳性自噬斑点显著增加；TEM观察表明(图B)，Obatoclax处理后，K1细胞出现与溶酶体共定位的自噬囊泡形成，并且损伤的溶酶体或大泡明显增加，间接表明Obatoclax中和了...
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摘要:为了简便自噬相关机理药物在胰岛β细胞上的高通量筛选,实验通过慢病毒转染技术,将RFP-GFP-LC3质粒转入大鼠胰岛β细胞株(RIN-m5f),用G418对感染细胞进行筛选,激光共聚焦进行活细胞拍摄验证,得到100%表达RFP-GFP-LC3质粒的细胞株。无血清饥饿处理细胞,结果显示:饥饿组GFP/RFP荧光点比值较对照组下降,P62蛋白表达量...
自噬流目前常用的检测方法有GFP-LC3-RFP-LC3ΔG。GFP-LC3在自噬溶酶体中很不稳定，而RFP-LC3ΔG则仍可以留在细胞质中，同时观察两种荧光颜色，可以用于监测自噬通量。但是上述这种方法由于需要转染质粒，一方面实验操作麻烦，另一方面也在部分实验中备受限制。之后会为大家详细介绍一种无需转染的自噬流检测方法。通过...
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This probe is cleaved to produce GFP-LC3 and RFP-LC3螖G, the former of which is degraded by autophagy, and the latter of which is maintained in the cytoplasm to serve as an internal control. Autophagic activity can be simply and quantitatively estimated by determining the ratio of GFP and ...