利用绿色荧光蛋白（GFP）在酸性环境中淬灭的特性，研究人员开发出了GFP-LC3工具检测自噬，可使用流式细胞仪定量检测，但使用荧光显微镜检测效果不够理想。2.3.2 RFP-GFP-LC3 在GFP-LC3的基础上，研究人员开发了GFP-RFP-LC3工具，红色荧光蛋白（RFP）在酸性环境中信号稳定。报告基因发出红色和绿色的荧光，图像重合时...
目前文献对自噬过程进行观察和检测常用的策略和手段有:通过western blot检测LC3的剪切;通过电镜观测自噬体的形成;在荧光显微镜下采用GFP(-RFP)-LC3等融合蛋白来示踪自噬体形成以及降解。近几年对自噬流的研究日趋增多,针对于此我们汉恒生物科技(上海)有限公司自主研发了用于实时监测自噬(流)的mRFP-GFP-LC3腺病毒,mRFP...
结论 成功建立稳定表达 RFP-GFP-LC3 的RAW264. 7 细胞株,为自噬研究建立了可靠细胞平台。[关键词] 自噬;慢病毒;RAW264. 7 细胞;稳定表达[中图分类号] R392. 12,Q344+. 13,R329. 2+ 5[文献标志码] AEstablishment of RAW264. 7 cell strain stably expressing RFP-GFP-LC3WANG Wan 1 ,ZHANG Qing ...
1 μM Obatoclax处理K1细胞24h后，GFP-RFP-LC3阳性自噬斑点显著增加；TEM观察表明(图B)，Obatoclax处理后，K1细胞出现与溶酶体共定位的自噬囊泡形成，并且损伤的溶酶体或大泡明显增加，间接表明Obatoclax中和了溶酶体。
pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG载体序列是一个大肠杆菌表达载体,Tac强启动子可以驱动GST促溶标签和目的基因融合表达,LacI阻碍蛋白和Laco操作子使本质粒在没有加入IPTG之前禁止表达,防止其影响细菌生长。表达后的融合蛋白可用凝血酶蛋白酶切割,再过一次GST柱子即可清除掉GST标签。 产品相册pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG...
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自噬流目前常用的检测方法有GFP-LC3-RFP-LC3ΔG。GFP-LC3在自噬溶酶体中很不稳定，而RFP-LC3ΔG则仍可以留在细胞质中，同时观察两种荧光颜色，可以用于监测自噬通量。但是上述这种方法由于需要转染质粒，一方面实验操作麻烦，另一方面也在部分实验中备受限制。之后会为大家详细介绍一种无需转染的自噬流检测方法。通过...
P1333/pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG哺乳自噬质粒,质粒(plasmid)是细菌或细胞染色质以外的,能自主复制的,与细菌或细胞共生的遗传成,质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的质粒。 详细内容 详细内容 公司简介 上海远慕生物专业供应抗生素、维生素、培养基、染色剂、酶/辅酶、碳水化合物、分离...
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摘要:为了简便自噬相关机理药物在胰岛β细胞上的高通量筛选,实验通过慢病毒转染技术,将RFP-GFP-LC3质粒转入大鼠胰岛β细胞株(RIN-m5f),用G418对感染细胞进行筛选,激光共聚焦进行活细胞拍摄验证,得到100%表达RFP-GFP-LC3质粒的细胞株。无血清饥饿处理细胞,结果显示:饥饿组GFP/RFP荧光点比值较对照组下降,P62蛋白表达量...