自噬双荧光标记慢病毒吉满自主研发的双荧光自噬慢病毒，可用于标记及追踪LC3以及自噬流的变化。其中GFP是酸敏感型GFP蛋白，而mRFP是稳定的荧光表达基团，不受外界影响。由于自噬小体进入第二阶段后，与溶酶体进行融合，形成自噬溶酶体。由于自噬溶酶体内的酸性环境，导致PH下降，GFP淬灭，因此，GFP的减弱表明溶酶体与自...
近几年对自噬流的研究日趋增多,针对于此我们汉恒生物科技(上海)有限公司自主研发了用于实时监测自噬(流)的mRFP-GFP-LC3腺病毒,mRFP 用于标记及追踪LC3,GFP的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体,即由于GFP荧光蛋白对酸性敏感,当自噬体与溶酶体融合后GFP 荧光发生淬灭,此时只能检测到红色荧光。这种串联...
汉恒独家推出双荧光LC3细胞自噬腺病毒 双荧光指示体系:汉恒生物科技(上海)有限公司已开发出用于产品。 mRFP 用于标记及追踪LC3,GFP 的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体,即由于GFP 荧光蛋白对酸性敏感,当自噬体与溶酶体融合后GFP 荧光发生淬灭,此时只能检测到红色荧光。
2.3荧光蛋白标记检测 2.3.1 GFP-LC3 利用绿色荧光蛋白（GFP）在酸性环境中淬灭的特性，研究人员开发出了GFP-LC3工具检测自噬，可使用流式细胞仪定量检测，但使用荧光显微镜检测效果不够理想。2.3.2 RFP-GFP-LC3 在GFP-LC3的基础上，研究人员开发了GFP-RFP-LC3工具，红色荧光蛋白（RFP）在酸性环境中信号稳定。...
红色荧光点-绿色荧光点-LC3(redfluorescencepoint-greenfluores-cencepoint-LC3,RFP-GFP-LC3)融合蛋白是一种方便的自噬荧光蛋白标记物。在自噬发生初期, 胞浆型LC3转变为膜型LC3,在荧光显微镜下可观察到红色/绿色共定位的点状聚集。自噬后期,溶酶体与自噬体融合形成自噬溶酶体,细胞环境pH发生变化。当环境pH<5时,GFP...
自噬流目前常用的检测方法有GFP-LC3-RFP-LC3ΔG。GFP-LC3在自噬溶酶体中很不稳定，而RFP-LC3ΔG则仍可以留在细胞质中，同时观察两种荧光颜色，可以用于监测自噬通量。但是上述这种方法由于需要转染质粒，一方面实验操作麻烦，另一方面也在部分实验中备受限制。之后会为大家详细介绍一种无需转染的自噬流检测方法。通过...
pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG载体序列是一个大肠杆菌表达载体,Tac强启动子可以驱动GST促溶标签和目的基因融合表达,LacI阻碍蛋白和Laco操作子使本质粒在没有加入IPTG之前禁止表达,防止其影响细菌生长。表达后的融合蛋白可用凝血酶蛋白酶切割,再过一次GST柱子即可清除掉GST标签。 产品相册pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG...
LC3是自吞噬体上微管相关蛋白轻链3,我们构建并筛选获得了表达LC3-GFP融合蛋白的稳定细胞株,该细胞株可用来观察药物对细胞自噬的影响。目前根据发生过程分为三类:Macroautophagy,Microautophagy和Chaperone-mediated autophagyCMA),大自噬(Macroautophagy)即我们说的自噬(autophagy);微自噬(Microautophagy):是指溶酶体主动、...
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无自噬时,RFP-GFP-hLC3融合蛋白弥散在胞浆中,在荧光显微镜下显示为黄色斑点;自噬形成时,由于自噬小体进入第二阶段后,与溶酶体进行融合,形成自噬溶酶体。自噬溶酶体由于溶酶体内部的酸性环境,可以导致PH下降,GFP淬灭,因此,GFP的减弱可指示自噬溶酶体形成的顺利程度,GFP越少,则从自噬小体到自噬溶酶体阶段流通得越...