自噬双荧光标记慢病毒吉满自主研发的双荧光自噬慢病毒,可用于标记及追踪LC3以及自噬流的变化。其中GFP是酸敏感型GFP蛋白,而mRFP是稳定的荧光表达基团,不受外界影响。由于自噬小体进入第二阶段后,与溶酶体进行融合,形成自噬溶酶体。由于自噬溶酶体内的酸性环境,导致PH下降,GFP淬灭,因此,GFP的减弱表明溶酶体与自...
mRFP 用于标记及追踪LC3,GFP 的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体,即由于GFP 荧光蛋白对酸性敏感,当自噬体与溶酶体融合后GFP 荧光发生淬灭,此时只能检测到红色荧光。 我们在显微镜成像后红绿荧光merge后通过merge后出现的黄色斑点即只是自噬体.红色的斑点指示自噬溶酶体,通过不同颜色斑点的计数可以清晰的...
(四)结果分析 mRFP-GFP-LC3串联荧光蛋白腺病毒中表达的GFP和mRFP用于标记及追踪LC3,GFP 的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体(由GFP荧光蛋白对酸性敏感,当自噬体与溶酶体融合后GFP 荧光发生淬灭,此时只能检测到红色荧光,原理如下图所示)。 。 。 统计方法 SHAPE 我们在显微镜成像后红绿荧光merge后...
2.3荧光蛋白标记检测 2.3.1 GFP-LC3 利用绿色荧光蛋白(GFP)在酸性环境中淬灭的特性,研究人员开发出了GFP-LC3工具检测自噬,可使用流式细胞仪定量检测,但使用荧光显微镜检测效果不够理想。2.3.2 RFP-GFP-LC3 在GFP-LC3的基础上,研究人员开发了GFP-RFP-LC3工具,红色荧光蛋白(RFP)在酸性环境中信号稳定。...
GFP-LC3在自噬溶酶体中很不稳定,而RFP-LC3ΔG则仍可以留在细胞质中,同时观察两种荧光颜色,可以用于监测自噬通量。但是上述这种方法由于需要转染质粒,一方面实验操作麻烦,另一方面也在部分实验中备受限制。之后会为大家详细介绍一种无需转染的自噬流检测方法。通过DAL Green+DAP Red两种探针联用,检测自噬流的发生...
摘要:为了简便自噬相关机理药物在胰岛β细胞上的高通量筛选,实验通过慢病毒转染技术,将RFP-GFP-LC3质粒转入大鼠胰岛β细胞株(RIN-m5f),用G418对感染细胞进行筛选,激光共聚焦进行活细胞拍摄验证,得到100%表达RFP-GFP-LC3质粒的细胞株。无血清饥饿处理细胞,结果显示:饥饿组GFP/RFP荧光点比值较对照组下降,P62蛋白表达量...
pMRX-IP-GFP-LC3-RFP-LC3ΔG载体序列收到货后请根据标签上文字判断产品属性(质粒/甘油菌) 1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min; 2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记; 3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min; 4、42℃热激90s...
无自噬时,RFP-GFP-hLC3融合蛋白弥散在胞浆中,在荧光显微镜下显示为黄色斑点;自噬形成时,由于自噬小体进入第二阶段后,与溶酶体进行融合,形成自噬溶酶体。自噬溶酶体由于溶酶体内部的酸性环境,可以导致PH下降,GFP淬灭,因此,GFP的减弱可指示自噬溶酶体形成的顺利程度,GFP越少,则从自噬小体到自噬溶酶体阶段流通得越...
目的建立能够稳定表达红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-微管相关蛋白轻链3(RFP-GFP-LC3)的小鼠RAW264.7巨噬细胞。方法构建含RFP-GFP-LC3基因的慢病毒重组质粒载体,将重组质粒与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,收集病毒上清后感染RAW264.7细胞。经嘌呤霉素筛选获得稳定表达RFP-GFP-LC3的RAW264.7细胞株,用荧光显微镜和流式...
技术交流|GFP-LC3或者 RFP- GFP-LC3质粒 请问万能的实验组有没有人有,可以馈赠一些吗😭😭🙏🏽🙏🏽🙏🏽🙏🏽🙏🏽汉恒的腺病毒很贵,孩子的组穷哭了 好久没上豆瓣了,下载回来碰碰运气😭