实时荧光定量PCR，也叫Real-Time PCR，即二代PCR，是指在PCR扩增反应体系中加入荧光染料或者荧光基团，在整个PCR过程中通过收集荧光信号实时监测每一个循环中扩增产物量的变化，最后通过标准曲线和CT值对待测样品进行定量分析。qPCR常用的有两种方法：SYBR Green法和TaqMan探针法。① 荧光染料法（SYBR Green）：SYBR G...
数字PCR即三代PCR,是对原始PCR的另一种改进,是一种能够实现核酸绝对定量的精准检测技术,基于泊松分布原理将核酸样品分配到大量独立、平行的微反应单元(纳升级)中,使每个反应室中平均只有一个拷贝或者没有目标DNA分子,然后加入荧光信号进行扩增,从而实...
建议实时定量PCR (quantitative real-time PCR) 应当简写为qPCR,反转录PCR (reverse transcription–qPCR) 应当简写为RT-qPCR。用RT-PCR简写表示qPCR可以引起混乱,并且与传统RT-PCR的平常应用不符。 1.2内参基因 内参基因应当指的是参照基因(reference genes),而不是管家基因(housekeeping genes)。 1.3 TaqMan探针 TaqM...
一、PCR原理和历史 二、标准PCR实验原理 影响PCR实验结果有5个关键因素: PCR的三个标准步骤 三、不同类型的PCR 四、PCR的应用 五、PCR实验相关资料下载 推荐内容 PCR——实验室必备实验,从基因鉴定到信号通路验证,几乎每周都要 P 个三五次,但是,有多少人能将 RT-PCR、qPCR、Real-time PCR、Real-time RT-PCR...
普通PCR即第一代PCR技术,以双链DNA为模板,以dNTP为底物进行扩增,特异性地扩增双链DNA的过程,然后采用琼脂糖凝胶电泳对产物进行定性分析。 PCR的过程大致可分为高温变性、低温退火、适温延伸三个基本反应步骤。 ① 高温变性:双链DNA模板经过高温(9...
Real-timePCR是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。Real-timePCR原理 1.1荧光染料和荧光探针 实时荧光定量 PCR 的化学原理包括探针类和非探针类两种。非探针类则是利用荧光染料（如SYBR Green I）或者...
1. 从少量样品中提取RNA(1-10mg组织或102-104细胞),加800ul Trizol,后加糖原,糖原会与RNA一同沉淀出来,糖原浓度不高于4mg/ml时不会影响反转录cDNA第一链的合成,也不影响PCR反应。 2.匀浆后,加氯仿前,样品可在-70℃放置一个月以上。RNA沉淀可以保存在75%酒精中,2-8℃一个星期或-20℃一年以上。如果要长期...
实时荧光定量PCR,也叫Real-Time PCR,即二代PCR,是指在PCR扩增反应体系中加入荧光染料或者荧光基团,在整个PCR过程中通过收集荧光信号实时监测每一个循环中扩增产物量的变化,最后通过标准曲线和CT值对待测样品进行定量分析。qPCR常用的有两种方法:SYBR Green法和TaqMan探针法。
(三)易混淆的PCR概念 很多人误以为RT-PCR是Real-time PCR的缩写,因此将二者混为一谈,但实际上是不一样的,国际上的约定俗成的是:RT-PCR特指反转录PCR,而Real-time PCR一般缩写为qPCR(quantitative real-time PCR)(见前面的介绍)。 下面详细介绍反转录PCR ...