Real Time PCR,即实时荧光定量PCR,也被称为定量PCR或qPCR,是实时监测PCR扩增产物并进行解析的方法。 由于定量PCR具有操作简单、快速方便、灵敏度高、重复性好、污染率低等优点,被广泛应用于医学检测、药物疗效考核、基因表达研究、转基因研究、基因检测、病原体检测、动植物检测、食品检测等各种领域。 所以,无论您从...
实时荧光定量PCR，也叫Real-Time PCR，即二代PCR，是指在PCR扩增反应体系中加入荧光染料或者荧光基团，在整个PCR过程中通过收集荧光信号实时监测每一个循环中扩增产物量的变化，最后通过标准曲线和CT值对待测样品进行定量分析。qPCR常用的有两种方法：SYBR Green法和TaqMan探针法。① 荧光染料法（SYBR Green）：SYBR G...
实时荧光定量反转录PCR(Real-time RT-PCR,RT-qPCR)是qPCR和RT-PCR的组合,所以RT-qPCR(也有人写成qRT-PCR)是结合了荧光定量技术的反转录PCR,即以mRNA或总RNA为模板,先反转录得到cDNA,再以cDNA为模板,通过荧光定量PCR进行定量检测分析(RT-PCR只可以定性,但不能进行定量分析)。 (DOI: 10.1063/5.0021270) 总的...
建议实时定量PCR (quantitative real-time PCR) 应当简写为qPCR,反转录PCR (reverse transcription–qPCR) 应当简写为RT-qPCR。用RT-PCR简写表示qPCR可以引起混乱,并且与传统RT-PCR的平常应用不符。 1.2内参基因 内参基因应当指的是参照基因(reference genes),而不是管家基因(housekeeping genes)。
Real-time PCR有多种应用,其中包括基因表达研究。通过实时监测特定基因的表达水平,我们可以了解基因在不同条件下的转录变化情况,从而理解其在生物过程中的功能和调控机制。此外,Real-time PCR还可以用于微生物检测。通过设计特异性的引物,可以快速、精确地检测病原微生物的存在与否,为临床诊断和疾病防控提供帮助。 除了...
1. 从少量样品中提取RNA(1-10mg组织或102-104细胞),加800ul Trizol,后加糖原,糖原会与RNA一同沉淀出来,糖原浓度不高于4mg/ml时不会影响反转录cDNA第一链的合成,也不影响PCR反应。 2.匀浆后,加氯仿前,样品可在-70℃放置一个月以上。RNA沉淀可以保存在75%酒精中,2-8℃一个星期或-20℃一年以上。如果要长期...
1. 普通PCR 普通PCR又称为一代PCR,通过使用普通PCR扩增仪来扩增目标基因,然后使用琼脂糖凝胶电泳来对扩增产物进行定性分析。 2. qPCR,实时荧光定量PCR,Real-timeQuantitative PCR qPCR是一种用于快速和精确测量DNA或RNA样本中的特定目标序列数量的分子生物学技术。该技术结合了PCR和荧光探针技术,通过监测PCR反应过程中...
RT-PCR,即逆转录PCR(reverse transcription PCR),是聚合酶链式反应 (PCR) 的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。RT-PCR是可以定性的,但不能进行定量检测的。 Real-time PCR和QPCR(Quantitative Real-time PCR)是一码...
实时PCR基于聚合酶链反应原理,通过扩增目标DNA或RNA序列来检测其存在。实时PCR使用一对特异性引物,即前向引物和反向引物,与目标序列的两侧结合。在反应过程中,DNA聚合酶会复制模板DNA,并在每个引物的结合位点依次合成新的DNA链。 然而,与传统PCR不同的是,实时PCR在反应混合物中加入了一种叫做探针的荧光探测剂。这种...