【细胞治疗干货帖】复制型病毒——RCL/RCR检测 细胞株检定复制型病毒检测RCL/RCR TestingCAR-T细胞疗法免疫细胞疗法是指采集人体自身免疫细胞, 经过体外改造、培养,使其数量扩增或增加其靶向杀伤能力,然后再回输到患者体内,达到杀灭血液及组织中病原体、肿瘤细...
细胞株检定复制型病毒检测RCL/RCR TestingCAR-T细胞疗法免疫细胞疗法是指采集人体自身免疫细胞, 经过体外改造、培养,使其数量扩增或增加其靶向杀伤能力,然后再回输到患者体内,达到杀灭血液及组织中病原体、肿瘤细胞的目的。其中CAR-T疗法是目前临床研...
3PERT法测定逆转录酶活性的方法，它可以用来检测RCL相关的不同结构的逆转病毒，缺点为在某些细胞检测中，存在背景高的现象。美国FDA要求对于采用γ-逆转录病毒载体和慢病毒载体的产品，需要在整个生产过程及不同阶段进行RCL/RCR检测，针对载体生产用主细胞库、工作细胞库、生产终末细胞、载体上清液及在体外培养超过4天...
测定逆转录酶活性的方法,它可以用来检测RCL相关的不同结构的逆转病毒,缺点为在某些细胞检测中,存在背景高的现象。 美国FDA要求对于采用γ-逆转录病毒载体和慢病毒载体的产品,需要在整个生产过程及不同阶段进行RCL/RCR检测,针对载体生产用主细胞库、工作细胞库、生产终末细胞、载体上清液及在体外培养超过4天的载体转到...
尽管慢病毒载体具有复制缺陷,但如果在慢病毒生产过程中发生重组可能有形成复制型慢病毒(RCL)或复制型逆转录病毒(RCR)的潜在风险。
常见的检测方法包括指示细胞培养法、直接qPCR法等。建议采用指示细胞培养法对慢病毒载体进行RCL检测。RCL检测指标方面,通常认为p24蛋白、逆转录酶活性、psi-gag和VSV-G序列等的检出可反映RCL的存在,结合病毒载体具体情况和研究情况,选择合适的检测指标。 美国FDA 2020年发布的关于RCR/RCL检测指南提出:对于RCR/RCL的...
测定逆转录酶活性的方法,它可以用来检测RCL相关的不同结构的逆转病毒,缺点为在某些细胞检测中,存在背景高的现象。 美国FDA要求对于采用γ-逆转录病毒载体和慢病毒载体的产品,需要在整个生产过程及不同阶段进行RCL/RCR检测,针对载体生产用主细胞库、工作细胞库、生产终末细胞、载体上清液及在体外培养超过4天的载体转到...
二、RCL检测方法分析 美国FDA 2020年发布的关于RCR/RCL检测指南提出:对于RCR/RCL的检测包含指示细胞培养法、ELISA法(p24蛋白测定)、PCR/Q-PCR法(通过psi-gag或VSV-G聚合酶链反应)、PERT法(产物增强性逆转录检测法)共4种检测方法。 复制型慢病毒RCL的指示细胞培养法检测需28天,耗时较长;而基于VSV-G序列的Q-...
成为近年来一种发展较快的抗肿瘤治疗技术,但实际应用中,以逆转录病毒或慢病毒为载体的CAR-T细胞治疗产品,也仍然存在一定安全隐患,其主要原因在于,作为载体的逆转录病毒或慢病毒仍有可能产生具体有复制能力的病毒,即产生复制性逆转录病毒(replication competent retroviruses,RCR)或产生复制性慢病毒(replication competent ...
二、RCL检测方法分析 美国FDA 2020年发布的关于RCR/RCL检测指南提出:对于RCR/RCL的检测包含指示细胞培养法、ELISA法(p24蛋白测定)、PCR/Q-PCR法(通过psi-gag或VSV-G聚合酶链反应)、PERT法(产物增强性逆转录检测法)共4种检测方法。 复制型慢病毒RCL的指示细胞培养法检测需28天,耗时较长;而基于VSV-G序列的Q-...