如Robert等人根据GAPDH在人类72个不同组织中的表达研究,结果显示GAPDH表达量最高的骨骼肌组织相对于表达量最低的乳房组织,其表达量竟相差了15倍。Glare等人利用qRT-PCR技术检测GAPDH在支气管肺泡灌洗回收液里的细胞和支气管内膜活检组织中的表达时,发现其在支气管患者组织的表达量低于正常人组织的表达量。因此,GAPDH...
咱们先看一下文献中处理qRT-PCR的方法。用的是△△CT。 什么意思呢,咱们使用一个简单的案例进行演示。 案例:加入药物后观察A基因的变化。使用GAPDH为内参。结果如下 怎么计算呢,我们首先保证数据能用的情况下算出平均值。 然后使用同一组的目的基因-内参基因,这是第一个△ct △ct越大,那么它的mRNA水平越低。...
1基本数据梳理 (a)Ct:表示的是循环阈值,基因和管家基因(内参,一般是β-Actin或者GAPDH或者α-tubulin等,具体内参根据组织或者细胞而定)有其对应的Ct值; (b)△Ct:表示的基因Ct值减去管家基因Ct值(即:△Ct =Gene△Ct- Housekeeping gene Ct); (c)参考Ct:一般选择对照组的△Ct的均值(即:means/average of NC...
很多qRT-PCR试验只选择单一的内参基因来校正与标准化目的基因的表达,其中常用内参基因有GAPDH,β-actin、18S rRNA和28S rRNA等。 3.1 GAPDH 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)是糖酵解、糖异生及光合作用过程中碳固定循环中的关键酶,是最常用的内参基因之一。但是,许多研究表明GAPDH在某些特定条件下其表达存在不稳定性。
15、-Define Targets and Samples界面: Define Targets栏中:如果有GAPDH、PLK1、Akt、PI3K三个引物,则点击“ Add New Target ”三下,出现“Target1、Target2、Target3、Target4”三个=>将其重命名; Define Samples栏中:如果有6个样品(N;1.5;3;6;9;12),则点击“Add New Sample ”,出现“Sample 1、Sample...
【GAPDH】或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶（ glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase ）的英文缩写。GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，且GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般...
PCR Forward Primer和PCR Reverse Primer由上海生工公司合成,所有序列为文献验证或Primer Bank内提供序列,根据文献选择内参为GAPDH。内参U6和hsa-miR-1293的PCR Forward Primer和PCR Reverse Primer由锐博生物设计,由于该公司对其具有专利,故不予公开。 ②加样完毕后,贴上无酶PCR封板膜,用PCR刮板器将封板膜紧贴在96...
很多qRT-PCR试验只选择单一的内参基因来校正与标准化目的基因的表达,其中常用内参基因有GAPDH,β-actin、18S rRNA和28S rRNA等。 3.1 GAPDH 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)是糖酵解、糖异生及光合作用过程中碳固定循环中的关键酶,是最常用的内参基因之一。但是,许多研究表明GAPDH在某些特定条件下其表达存在不稳定性...
在qRT-PCR实验中,内参基因被用来作为数据标准化的对照,以校正作为模板的cDNA所存在的数量差异。常用来作为内参的有GAPDH、β-actin或rRNA。操作者应根据不同来源的样品选择不同的参照基因。 进行相对基因表达分析普遍采用操作简便的2-ΔΔCT法,此方法的应用基础是目标基因和参照基因的扩增效率都接近100%并且相互间效率...
千里光作为传统中药材, 富含黄酮和倍半萜等重要化合物.该实验基于千里光转录组数据, 选择了ABCT, ACT1, ACT2, ACT3, ACBP, ARF, ATPS, EF-H, EF-1α, ETIF, GAPDH, GTPB, MPS, UCE和60S等15个候选内参基因, 初步用RT-PCR分析了这些候选基因在千里光不同组织中的表达情况, 从而筛选出ACT1, ACBP,...