首先，使用Takara试剂盒逆转录RNA，关键步骤包括配制反应液（含Oligo dT Primer、dNTPs、模板RNA和RNase抑制剂等），在65℃保温后进行酶反应，再通过95℃终止酶活性。然后，进行PCR扩增，以cDNA为模板，通过精确设定的温度和循环次数，确保GAPDH基因片段的高效扩增。PCR产物的回收则借助TAKARA Minibest DNA Fr...
一般认为一些持家基因的表达量在不同状态下变化不大,所以可以认为它们表达是恒定的,故而用来做内参简而言之,就是你有两个样品(譬如不同生长条件或者不同组织的),要比较其中某基因A表达转录变化,就分别比较两个样品中A相对于GAPDH的表达即可.譬如,如果第一个条件下A:GAPDH=2,在第二个条件下为4,那么在第二个条...
),TAKARA code no. 9761: TAKARA Minibest DNA Fragment Purification kit ver.4.0。 (3)含有Xol I 和Bam H I酶切位点的GAPDH引物。 (4)10 mmol/L dNTP: dATP, dTTP, dGTP, dCTP, 浓度均为10 mmol/L。 (5)Taq DNA聚合酶。 (6)DEPC处理的ddH2O。 实验仪器与耗材:1.5 mL离心管,1000μl、200μl...
简而言之,就是你有两个样品(譬如不同生长条件或者不同组织的),要比较其中某基因A表达转录变化,就分别比较两个样品中A相对于GAPDH的表达即可.譬如,如果第一个条件下A:GAPDH=2,在第二个条件下为4,那么在第二个条件下A基因的转录提高了一倍 解析看不懂?免费查看同类题视频解析查看解答...
那么，这个时候GAPDH就派上用场了，GAPDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶的缩写，这个酶的基因是看家基因，也就是在机体各组织中的表达都趋于稳定和接近，类似的还有actin蛋白，可以作为RT-PCR的内参，也就是衡量模板取样量的一个参照物。比如，在做某一基因的RT-PCR时，脑部组织和肌肉组织中该基因的拷贝数一致...
依据鸡A-FABP和H-FABP基因及参照基因GAPDH序列设计引物,以鸡心肌、胸肌和腿肌、肝脏和腹脂总RNA逆转录合成的cDNA为模板,GAPDH基因为参照基因,应用SYBRGreenI实时荧光定量PCR检测如皋黄鸡和安卡红鸡A-FABP和H-FABP基因的差异表达。结果表明:A-FABP、H-FABP基因和参照基因GAPDH基因融解曲线为单峰,无杂峰及二聚体,其...
因为GAPDH的基因表达量在是不同状态下是变化很小的,所以可以认为GAPDH表达是恒定的,所以可以选择它来做内参。拓展资料:GAPDH或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶( glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase )的英文缩写。GAPDH是糖酵解反应中的一个酶,广泛分布于各种组织中的细胞。该酶是糖酵解反应中的一个酶,由4个30-...
扩增效率(E)=10-1/斜率(理想的PCR扩增效率=2) 百分比表示为:e%=(E-1)×100% 同时是上面例子,如果Cdk5的扩增效率是70%;GAPDH的扩增效率是95%,那么处理所致的倍数变化(fold change)应该是 =(1.7)(25-22.1)/(1.95)(18.3-18.2) =4.36 即处理造成Cdk5表达量增加了3.36倍。
有两个基因可以供你选择，希望对你有帮助GAPDH基因：它是大肠杆菌 中表达相对稳定的基因之一，可以作为 ...
在进行RT-PCR实验时,选择合适的内参基因至关重要。以下是三种常用的内参基因及其优缺点: GAPDH 🌍 广泛存在于多种生物体中,细胞中含量丰富,占总蛋白的10%-20%。 具有高度保守的序列,在同种细胞或组织中的蛋白表达量通常恒定。 在糖酵解过程中起到关键作用,其表达水平可能受到多种因素的影响,如细胞增殖、肿瘤...