Pull-down实验,又称拉下实验,是一种体外亲和纯化技术。(这个实验跟免疫共沉淀实验很像,不同的是免疫共沉淀是在细胞里进行的。)一、原理:将一种蛋白质固定于某种基质上(如Sepharose),但细胞抽提液经过该基质时,可与该固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附,而没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。被吸附的...
Pull down实验 Pull down实验,又称拉下实验,是一种体外亲和纯化技术,蛋白Pull down技术可以提供一种诱饵蛋白来特异性识别配体蛋白质,以达到富集、分离、纯化某种配体蛋白质的目的,是体外研究蛋白与蛋白相互作用的有力工具。蛋白质Pull down将被亲和试剂标签(如谷胱甘肽-S-转移酶、组氨酸六肽、生物素)标记的诱饵蛋白...
RNA与蛋白质的相互作用也是非编码RNA发挥功能的主要作用机制之一,其中,RNA pull down是用于检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间互作的主要实验技术之一,也是近年来研究非编码RNA(如IncRNA、circRNA)与蛋白质相互作用及生物学功能验证的主要手段。 基本原理: RNA Pull-down作为研究RNA与蛋白互作的核心技术,是使用体外转录法标记...
拉下实验又叫做蛋白质体外结合实验(binding assay in vitro),是一种在试管法。简介 拉下实验(Pull-down assay)该实验是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术,近年来越来越受到广大学者的喜爱。其基本原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“...
Pull - down 实验 Pull - down 实验是一种用于研究蛋白质 - 蛋白质相互作用或蛋白质 - 小分子(如核酸、肽段等)相互作用的体外实验技术。它可以验证两个或多个生物分子之间是否存在直接的相互作用关系。通常会将一个已知的蛋白(称为诱饵蛋白)融合表达带有亲和标签(如谷胱甘肽 - S - 转移酶 - GST、组氨酸...
下拉实验(pull-down assay)是验证体外蛋白互作的主要方式,也是验证没有成熟抗体的蛋白互作的方式之一。通过体外表达亲和蛋白-GST,将亲和蛋白固化在谷胱甘肽亲和树脂上充当“诱饵蛋白”,将细胞或者组织的总蛋白和此“诱导蛋白”混合孵育后可从中捕获“目标蛋白”,最后通过洗脱的方式将“目标蛋白”洗脱后检测,就可以...
Pull-down 技术, 也叫蛋白质体外结合实验, 是一种行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术。 ▼实验原理 将靶蛋白-GST 融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽标记的珠子上, 作为与目的蛋白亲和的支撑物, 充当“诱饵蛋白”, 目的蛋白溶液与之孵育, 可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白), 洗脱结合物后通过 ...
Pull down 实验是一种研究蛋白质-蛋白质相互作用的技术,通常用于验证两种或多种蛋白质之间的直接结合关系。这种技术类似于共免疫沉淀 (Co-IP),但 pull down 实验通常使用纯化的重组蛋白质来拉取感兴趣的相互作用伙伴。Pull Down 实验的基本步骤 1. 融合蛋白的制备:通常将蛋白(bait,诱饵蛋白)与一个标签(如 ...