Protocol for MasterAmp™ High Fidelity RT-PCR KitHigh, MasterampKit, Fidelity Rtpcr
反转录PCR (reverse transcription PCR, RT-PCR),是指以mRNA为模板在反转录酶作用下合成的cDNA 第一链的PCR。该反应分为两步,第一步在单引物的介导和反转录酶的催化下合成RNA 的互补链cDNA; 第二步加热后cDNA 与RNA 链解离,然后与另一引物退火,并由DNA 聚合酶催化引物延伸生成双链DNA, 最后同常规PCR一样,...
实时荧光定量 PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR)是 DNA 的实时 PCR 扩增,通过荧光探针测量,最常见的是插入染料或基于水解的探针,从而实现 PCR 产物的定量(见图 2)。该技术常用于检测病原体的存在和确定感兴趣的 DNA 序列的拷贝数。 图2. qPCR 流程图[11]。 同样要经过多个扩增循环,其中模板 DNA 最初...
RT-PCR(逆转录PCR) 一、仪器 1.PCR仪 2.恒温水浴 3.小型低温高速离心机 4.紫外分光光度计 5.塑料制品:(包括枪头、EP管、匀浆管等)先将DEPC水从容量瓶中倒入瓷缸中,将塑料制品逐个浸泡其中,其中小枪头需要吸管打入DEPC水,过夜,然后高压,再烤干备用,实验前将枪头等放入吸头台,再高压一次(EP管) ...
逆转录 PCR(RT-PCR) 逆转录 PCR(Reverse transcription PCR, RT-PCR)可使用 RNA 作为模板生成互补 DNA(cDNA)。利用逆转录酶,产生 cDNA 的单链拷贝。然后,这可以通过 DNA 聚合酶扩增,产生双链 cDNA,进入基于 PCR 的标准扩增过程(图 4A)。 该技术可用于目标基因(GOIs)的分子克隆,其可研究用抑制剂、兴奋剂、...
We will provide both one-step and two-step protocols for RT-PCR. We recommend the two-step protocol for this class. In the one-step protocol, the components of RT and PCR are mixed in a single tube at the same time. The one-step protocol generally works well for amplifying targets tha...
• Lyo-ready Platinum II PCR Buffer is optimized to achieve the best performance for the reverse transcriptase and polymerase working as a pair in 1-step RT-qPCR. The buffer is also optimized for increased resistance to reaction inhibitors originating from sample material or nucleic acid ...
real-time RT-PCR中间的"RT"是 reverse transcripti on(逆转录),整个意思就是利用mRNA或总R NA为模板的实时逆转录PCR技术(quantitative R eal-time RT-PCR)。real time RT-PCR指的是qPC R+RT-PCR的组合,是说将mRNA逆转录为cDNA后再作为模板进行实时荧光PCR分析,因为RT-PCR是可以定性的,但不能进行定量检测...
RT-PCR protocolRT-PCR步骤 RNA提取(-70℃保存) 1.六孔板每孔细胞加入1ml Trizol,冰上放置5min,枪头吹打 2.将裂解液1ml转入一新EP管中(1.5ml),加氯仿0.2ml,剧烈振荡混合,室温放置5min,10000 rpm 4℃离心15min 3.转移上层水相(吸70%)到一新EP管中,加入等体积的异丙醇(约0.5ml),振荡混合,室温保存10...
RT-PCRprotocol RT-PCR 实验步骤 一、总RNA提取 1. 取200mg组织，放到1.5mlEP管中，加入1mlTrizol剪碎。 2. 震荡30s。 3. 加0.2ml氯仿，剧烈摇动30s，室温3min。 4. 12000×g，4℃离心，15min。 5. 吸上层无色水相，移入另一EP管中（约0.5ml）。 6. 加等体积异丙醇...