SSCP是单链构象多态性(single-strand conformation polymorphism,SSCP)的缩写。其原理是当双链DNA变性为两条单链后,各自会在中性条件下形成各自特定的空间构象,因而在电泳时将在不同的位置上出现各自电泳条带。如果DNA序列发生变化,甚至只有一个碱基变化,空间构象也有可能发生变化,电泳条带也随之变化。也就是说在相同...
PCR 仪上 95℃变性 10 分钟, 立即取出 PCR 产物连同架子一同置于冰上静置 5min,以免变性的产物复性。 注:3 和 4 步可以在制 SSCP 胶第四步后,等胶凝的过程中进行。 二.制胶 1. 装板。在所要进行实验的每一副玻璃板先用自来水冲洗,然后使用 ddH2O 冲洗,然后使用 吸水纸将玻璃板擦拭干,然后再玻璃板上...
PCR-SSCP是由1989年在日本创建的一种用于筛选突变的新技术，它是一种简单，快速且经济的点突变筛选方法。PCR-SSCP技术的基本原理是将PCR扩增后的DNA片段变性为单链DNA，在中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳单链DNA时，会形成不同的三维构象，其构象直接影响游泳速度，具有串联长度的DNA的单链的核苷酸序列的至少一部分可以产生...
PCR-SSCP于1989年首先报道,该方法的原理是基于序列不同的DNA单链片段,其空间构象亦有所不同,当其在非变性聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳时,其泳的位置亦发生变化而表现出不同序列单链其电泳迁频率的差异,从而据引判断有无突变存在.对于一段DNA来说,其单链具有特定的空间构象,这种空间构象的形成与该段DNA的碱基序列有...
CR-SSCP法:是一种基于单项链DNA构象差别的快速、敏感、有效的检测基于点突变的DNA多态方法。其基本原理是对已知基因点突变的遗传病,在其突变位点附近设计引物进行PCR扩增,将扩增的产物取出一部分,在96%的甲酰胺中变性,然后在不含变性剂的中性聚丙烯酰胺凝胶电泳中电泳,由于单链DNA中碱基对或聚集,当温度或变性剂等环...
聚合酶链式反应一单链构象多态性(PCR-SSCP)分析技术为分子生物学的研究提供了一个简单、快捷、经济的手段。在该技术中,首先利用PCR技术扩增目的DNA,扩增时利用引物标记法或碱基掺入法使扩增的产物带有标记,如荧光物质、同位素、生物素等。然后将扩增产物变性并进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,区别扩增产物一定长度核苷酸的...
PCR-SSCP是在完成靶DNA的PCR扩增之后进行单链DNA多态性分析的一种新方法。将单链的扩增DNA或组织基因组DNA通过中性的聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据其电泳位置的改变可分辨出单个碱基的改变。二、PCR-SSCP基本过程 1．PCR扩增靶DNA。2．PCR产物的快速变性而后快速复性，形成特定空间结构的DNA单链分子。3.非变性的聚丙烯...
PCR-SSCP分析的基本步骤包括：PCR扩增：首先，使用特定的引物对目标DNA序列进行PCR扩增。单链构象制备：PCR产物在加热至95°C的条件下变性，使双链DNA解链为单链。单链DNA在较低温度（通常在50-65°C之间）下复性，此时其构象稳定。凝胶电泳分析：将复性的单链DNA加载到聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳。由于单链DNA的...
PCR-SSCP是1989年日本关谷实验室结合PCR反应和单链DNA非变性聚丙烯胺电泳首先创立的,其基本原理是:在不含变性剂的中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳时,DNA单链的迁移率除与DNA链的长短有关外,更主要的是取决于DNA单链所形成的构象。在非变性条件下,DNA单链可自身折叠形成具有一定空间结构的构象。这种构象由DNA单链碱基顺序...