并使用nigericin诱导PMA分化的THP-1细胞的焦亡保护作为初筛的方法，该测试方法可以区分细胞毒性化合物，同时细胞焦亡也是目前已知的三种不同类型NLRP3炎症小体激活途径均可导致的结果，初筛的命中率很低。后续筛选使用nigericin诱导的THP-1细胞IL-1β分泌抑制和Pam3CSK4刺激的THP-1细胞的TNF-α分泌，这两种测试组合起来...
化合物20对THP1细胞中NLRP3依赖性caspase-1激活的平均IC50为0.051±0.033μM（n=4），对小鼠BMDMs中NLRP3依赖性IL-1β释放抑制的均值IC50>20μM。GDC-2394（20）抑制NLRP3诱导的THP-1细胞凋亡相关斑点样蛋白（ASC）斑点形成 NLRP3炎性体的激活需要ASC来激活caspase-1。在炎性小体激活后，ASC组装成大的蛋白...
特别是NLRP3炎症小体基因的表达增高,并且NLRP3炎症小体相关蛋白的表达也增高,我们还用激光共聚焦显微镜检测了NLRP3炎症小体在HTNV感染THP-1细胞后的定位情况,分别从基因和蛋白水平证实了HTNV感染可以引起NLRP3炎症小体的激活.此外,我们使用NLRP3siRNA和caspase-1抑制剂,进一步验证了NLRP3炎症小体在HTNV感染中的作用...
与此同时,作者在THP-1细胞中敲除VAPs或者OSBP后,发现在这些细胞能够在只有LPS预处理的情况下激活NLRP3炎症小体。这些结果表明,NLRP3激活物通过破坏EECS导致PI4P在内吞体上富集,进而促进NLRP3被募集到内吞体上并引发炎症小体激活和组装(图2)。 图2 NLRP3激活物破坏EECS,导致PI4P在内吞体上富集并激活炎症小体的...
并使用nigericin诱导PMA分化的THP-1细胞的焦亡保护作为初筛的方法,该测试方法可以区分细胞毒性化合物,同时细胞焦亡也是目前已知的三种不同类型NLRP3炎症小体激活途径均可导致的结果,初筛的命中率很低。后续筛选使用nigericin诱导的THP-1细胞IL-1β分泌抑制和Pam3CSK4刺激的THP-1细胞的TNF-α分泌,这两种测试组合起来...
THP-1细胞和BMDM细胞中,Nigericin刺激内源性ASC蛋白oligomerization,并且N蛋白可以促进这一反应(Fig.6f&6g)。此外,HEK293T-NLRP3细胞分别转染编码SARS-CoV-2-N蛋白及其截短突变体,ASC oligomerization被N1、N5、N6和N7蛋白激活,而不受N2、N3、N4、N8蛋白影响(Fig.6h)。所以,N蛋白序列260aa-340aa与NLRP3相互作...
AA 抑制了 IL-1β 的分泌和 ASC斑点的形成,同时也抑制了人THP-1 细胞的溶解性细胞死亡(图 3G-3I)。当 PA 用作 NLRP3 触发器时,AA 的抑制作用尤为明显,这表明 AA 在调节脂质驱动的炎症中可能起着重要作用(图 3J-3L)。在 10-40 μM 的浓度范围内,AA 可剂量依赖性地抑制 PA 激活后 NLRP3 诱导的 ...
他们发现,在尼日利亚霉素刺激的 THP-1 细胞中,PKD 或 JNK 的抑制都会导致 NLRP3 激活的降低。因此,AA 的存在抑制了 PKC、PKD 和 JNK 的激活,这可以通过减少的磷酸化来说明。胆盐石胆酸 (LCA) 也可抑制 NLRP3 炎症小体的激活。然而...
为了进一步证实USP19抑制NLRP3炎症体的激活,研究人员使用siRNAs敲除了WT和USP19-KO THP-1来源的巨噬细胞中内源性的Nlrp3,发现NLRP3的缺失抑制了USP19-KO细胞对内毒素和三磷酸腺苷的反应中IL-1β的上调。综上所述,这些结果表明,USP19缺乏...
本研究分析了SARS-CoV-1/2、HCMV和HCV等病毒,研究人员利用CRISPR-Cas9技术敲除THP-1巨噬细胞中的NLRP3和GSDMD基因,了解这两个基因在病毒糖蛋白诱导的炎症反应中的角色。实验结果显示,病毒糖蛋白能够强烈地诱导NLRP3炎症小体的激活和细胞焦亡,而NLRP3和GSDMD的敲除则显著地抑制了这些反应。这些结果不仅揭示了病毒糖...