mrna-lnp制备mRNA-LNP的制备方法有多种,包括脂质体挤出法、薄膜水化法、纳米沉淀法、微流控以及冲击射流式混合法等。不同的制备方法有各自的优势与缺陷,制备出的LNP能否保持其囊泡均匀稳定,成了评价LNP质量的重要指标。 同时,mRNA-LNP的制备也涉及到一些特定步骤。例如,在脂质体法制备过程中,需要先将磷脂等成分...
实验方案:微流控混合方式制备包裹mRNA的脂质纳米颗粒(mRNA-LNP的制备) 实验目的: 参照Moderna、BioNtech 和 Alnylam 的新冠疫苗配方,以SM102、ALC-0315、MC3为主要阳离子脂质制备包载 mRNA 的脂质纳米颗粒(lipid nanoparticles, LNPs)。 实验原理: ALC-0315、 MC3、和 SM102 是三种可用于人体的脂质。在酸性条件下...
mRNA-LNP 制备是 mRNA 疫苗从纯化 mRNA(原液)到成品(制剂)的生产过程的关键步骤,涉及脂质制备或筛选、mRNA 包封 / 装载、纯化等工序,目前最常用的方法是将水相和脂质成分快速混合的微流控法。 mRNA-LNP 的应用进展 脂质纳米颗粒(lipid nanoparticle,LNP)通常由多种脂质组成,用于包封 mRNA 和增强其稳定性的递送系...
制备GFP-mRNA-LNP并转染扩增的 NK 细胞，可产生＞98%的GFP阳性细胞。将GFP-mRNA-LNP转染后16h的NK 细胞冻存在 D10 冻存培养基中，解冻后的转染NK细胞能够维持GFP表达水平，并且在解冻后72h显示出高水平的GFP表达（94.5%）。03 基于mRNA-LNP技术制备CAR-NK细胞 制备CD19-Flag-CAR mRNA-LNP和人源化BCMA-CA...
耀海生物采用的Ignite™作为mRNA脂质纳米颗粒制备系统,它是PNI(Precision NanoSystems)的Nanoassemblr®平台推出的微流控混合仪,适用于LNP、脂质体等纳米结构的制备,可以实现纳米颗粒组分在纳升水平以毫秒混合,保证混合效果。通过结合优化、精确...
其中,微流控混合法由于其高包封率,LNP粒径、单分散度(PDI)等核心指标高度可控性以及良好的重复性,已经成为目前临床前研究的首选方法。德泰生物mRNA脂质纳米粒制备系统,采用微流控技术,芯片采用316L材质,可多次重复使用,无需预处理或清洁;可处理样品体积1-20mL,制备纳米颗粒粒径70-2000nm,PDI低于0.3,包封率可达90...
)以及配套的 LNP-B1 微混合芯片,按照Moderna、BioNtech和Alnylam的新冠疫苗配方,制备包载mRNA的脂质纳米颗粒(lipid nanoparticles, LNPs)。实验过程包括复方脂质-乙醇溶液、柠檬酸缓冲液的配置,mRNA-柠檬酸缓冲液的计算与配制,以及关键的微流控混合步骤,最终对LNP的粒径、PDI进行检测,并提供详细的产物处理和保存方法。
一、使用LNP-B0芯片按照Moderna或者Pfizer的公开配方制备mRNA-LNP,DLS测量出现两个峰,一个小于100 nm,另外一个峰大于1000 nm的峰,并且PDI大于0.2以上,应该如何处理? 答:出现这种情况一般有三个原因: 1. 进行DLS测量时测量杯壁上有划痕,对于多次反复重复使用,并反复用吸水纸擦拭的测量杯,该现象更加明显。当激光打...
到目前为止,业界进行mRNA制备的主要工艺路线如图所示,主要包括:质粒制备与线性化 ->体外转录->加帽加性-> mRNA纯化->mRNA-LNP制备->LNP纯化->LNP除菌过滤->制剂灌装。本文主要讨论后段工艺,即mRNA-LNP制备、纯化及除菌过滤过程中需要考虑的工艺要素。