参照Moderna和BioNtech的新冠疫苗配方,以ALC-0315、MC3、SM102为主要脂质,制备包载mRNA的脂质纳米颗粒(LNP)。 实验原理: ALC-0315、MC3、和SM102是三种可用于人体的可解离脂质,在酸性条件下可质子化形成阳离子脂质,通过静电作用和带负电的mRNA结合,形成载有mRNA的脂质纳米颗粒(lipid nanoparticles, LNPs)。本实验中采...
mRNA-LNP 制备是 mRNA 疫苗从纯化 mRNA(原液)到成品(制剂)的生产过程的关键步骤,涉及脂质制备或筛选、mRNA 包封 / 装载、纯化等工序,目前最常用的方法是将水相和脂质成分快速混合的微流控法。 mRNA-LNP 的应用进展 脂质纳米颗粒(lipid nanoparticle,LNP)通常由多种脂质组成,用于包封 mRNA 和增强其稳定性的递送系...
实验步骤参照第一节:《实验方案:微流控混合方式制备包裹mRNA的脂质纳米颗粒(mRNA-LNP的制备)》。 附件5:mRNA-LNP转染HEK-293T 实验条件:见:第5节:《实验方案:mRNA -LNP转染293T细胞》。
瀚海新酶在 mRNA 生产和 LNP 制备方面,拥有先进技术和丰富经验,采用简洁快速,高稳定性、高质量的微流控技术进行mRNA-LNP 的制备,可提供不同规格的高产量、高纯度、高性价比的 mRNA 和 mRNA-LNP 的定制化服务,可根据客户需求定制不同粒径大小的 LNP,同时提供 mRN...
1.mRNA/LNP的组成和结构 准确说来,载mRNA的脂质纳米粒(Lipid nanoparticle,LNP)除了含有带负电荷的mRNA外,另有四种成分:可电离的阳离子磷脂(ionizable lipids),中性辅助磷脂,胆固醇,聚乙二醇修饰的磷脂(PEGylated lipid)。 表五LNP各组分的比例 信息来源:Vaccines ...
同时,mRNA-LNP的制备也涉及到一些特定步骤。例如,在脂质体法制备过程中,需要先将磷脂等成分溶解在有机溶剂中,然后通过旋转蒸发等方法去除有机溶剂,再将其与mRNA溶液混合,通过超声或高压匀质等方法制备成脂质体。之后,再通过挤出或其他方法制备成均匀的mRNA-LNP。 具体制备方法及步骤可能会因实际需求和配方进行调整,...
01 抗体偶联mRNA-LNP的制备 1.1 mRNA制备 对Cre重组酶和萤火虫荧光素酶的编码序列进行密码子优化，合成并分别克隆到pUC-ccTEV-Cre-A101和pUC-ccTEV-Luc2-A101质粒中。利用T7 RNA聚合酶在线性质粒上合成含101个核苷酸长度的poly(A)尾的mRNA，其中用m1Ψ-5'-三磷酸腺苷代替UTP，纯化、分析后-20℃保存。1.2 ...
LNP(脂质纳米颗粒)是用于包裹和保护mRNA的载体。LNP的制备通常包括以下步骤: 脂质成分的选择和混合:选择合适的脂质成分,如磷脂、胆固醇等,并按照一定的比例混合。 乳化和均质化:将脂质混合物与mRNA溶液在适当的条件下进行乳化和均质化,形成LNP前体。 过滤和浓缩:通过过滤去除大颗粒和杂质,然后对LNP前体进行浓缩,以提高...
二、肽偶联LNP-mRNA的制备与表征 LNP组分包括阳离子脂质体（DLin-MC3-DMA）、胆固醇、磷脂（DSPC）和聚乙二醇化脂质（DMG-PEG2000），以50: 38.5: 10: 1.5的摩尔比混合，溶解在乙醇溶液中。随后通过微流控设备包封mRNA，将LNP与酸性溶液中mRNA以1: 3比例混合，经磷酸盐缓冲液（PBS）透析、超滤浓缩得到包封...