包封率(%) = [载药量/破乳后读值] × 100% 8) 同时可进行RNA利用率的计算,公式为: RNA利用率 (%) = [载药量/RNA投入量] × 100 % --[3] 经检测,Triton X-100的存在会影响RNA检测的准确度, 故推荐制作新标曲。 实验方案:使用酶标仪测定LNP包封率 实验目的: 对制备的 LNP 包封 mRNA 的效果...
Triton-100作为一种表面活性剂常被用做破乳剂,使用1%的Triton-100处理获得的LNP-mRNA可以使包载的核酸释放,得到总核酸量。通过计算破乳前后核酸量的差异得到载药量,再除以总核酸量即可得到包封率,即: 包封率(%)=(破乳后定量-破乳前定量)/破乳后定量 实验材料: Quant-iT™ RiboGreen™ RNA 检测试剂盒(Therm...
同时,假设90%的包封率,即可估算游离RNA浓度。然后根据标曲的最高浓度计算需要稀释的大致倍数。 这样我们就可以使用1X TE buffer将RNA-LNP稀释适合倍数以检测LNP外游离RNA浓度,使用2% Triton-TE buffer将RNA-LNP稀释适合倍数以检测总RNA浓度,建议每项检测至少两个不同稀释倍数。 最后,分别移取100 μL稀释后的样本...
LNP包封率分析方法的建立与开发过程,一般建议制备两种RNA标准曲线(高浓度和低浓度),一个用于计算总mRNA含量,一个用于计算游离mRNA的含量。 mRNA-LNP样品准备: 使用1×PBS(或1×TE)缓冲液稀释mRNA-LNP样品,以达到标准曲线中点附近的近似理论浓度(例如,初始浓度为100 μg/mL,稀释50倍得到约2 μg/mL的mRNA样品)。
Triton-100 作为一种表面活性剂常被用做破乳剂,使用 1%的 Triton-100 处理获得的 LNP-mRNA 可以使包载的核酸释放,得到总核酸量。通过计算破乳前后核酸量的差异得到载药量,再除以总核酸量即可得到包封率,即:包封率(%)=(破乳后定量-破乳前定量)/破乳后定量...
数据处理，根据标样得到的荧光值和浓度梯度，绘制标准曲线，得到浓度计算公式。把样品荧光值代入浓度计算公式，就可以得到对应的浓度，还需要乘以稀释倍数，才能计算得到Total RNA浓度和游离RNA浓度，最后计算包封mRNA浓度等于Total RNA浓度减去游离RNA浓度。图11 数据处理 六、总结 LNP-RNA包封率的测定方法是在RiboGreen...
mrna-lnp的包封率是指包封于脂质纳米颗粒内部的mrna占全部mrna的比例,是评价脂质纳米颗粒性质的重要指标。包封率的测定方法一般是先通过一定的方法(如柱层析法、透析法、超速离心法等)把未包封的游离药物与脂质纳米粒分离,并分别进行测定后计算得出。 3、在现有技术中,核酸脂质纳米颗粒(lipid nanoparticles,lnp)的包...
具体的包封率结果为ASO 16~23%,siRNA 25~33%,适配体8~31%,996碱基mRNA35~ 49%,1929 碱基mRNA为35~45%。用ALC和DSPC配制的LNP显示出最高的包封率。 耀海RNA平台交付的多个mRNA-LNP样品检测结果显示, LNP成品的包封率大于90%。详情可咨询菌菌:13380332910(微信同号)...
mRNA‑LNP的包封率是指包封于脂质纳米颗粒内部的mRNA占全部mRNA的比例, 是评价脂质纳米颗粒性质的重要指标。包封率的测定方法一般是先通过一定的方法(如柱层析法、 透析法、超速离心法等)把未包封的游离药物与脂质纳米粒分离,并分别进行测定后计算得出。
包封率检测:通过测定LNP中mRNA的含量,计算包封率。 无菌检测:确保LNP-mRNA复合物无菌。 生物活性检测:在适当的细胞模型或动物模型中检测LNP-mRNA的生物活性。 6.储存和运输 LNP-mRNA通常需要在低温下储存和运输,以保持其稳定性和活性。在储存和运输过程中,需要注意以下事项: 温度控制:将LNP-mRNA储存在-80℃或更...