（1）启动子选择性多：基于miR30的shRNA可以通过多种pol II启动子转录，包括CMV、CAG、诱导型启动子和组织特异性启动子等，尤其是组织特异性启动子，在这类启动子的作用下，利用miR30结构实现的基因敲低往往只限于某些特定的组织或器官，同时表现出发育调节等特性。汉恒生物为科研工作者提供近50种特异性启动子，能...
基于miRNA骨架的shRNA干扰载体，采用了pol II型启动子(包括多种组织特异性启动子)驱动，从而实现特定组织中的基因沉默。目前用于干扰作用的miRNA骨架(如miR30、miR155、miR17-92等)中，最常用的就是miR30结构。载体优势 01启动子选择性多 基于mir30的shRNA可以通过RNA聚合酶II启动子转录，包括CMV、CAG、诱导型启动...
图1 miRNA和siRNA作用机制 具体构建方案为将miR30的5'flanking region和3'flanking region序列保留，然后将其成熟区域的序列替换成靶点序列，示意图如下：图2 基于miR30结构的shRNA载体 Mir30结构的优势 （1）启动子选择性多：基于miR30的shRNA可以通过多种pol II启动子转录，包括CMV、CAG和特异性启动子等。（2）...
1) 启动子选择性多：基于miR-30的shRNA可以通过多种RNA聚合酶II启动子转录，包括广谱启动子（CMV、CAG和EF1a等）、组织特异性（hSyn、TBG和cTnT等）或诱导型启动子（四环素启动子TRE）。2) 实现多个shRNA共表达：由于RNA聚合酶II可以启动较大的基因转录，因此多个shRNAmiRs可以作为多顺反子由单个启动子驱动表达。
哺乳动物 miR30 - shRNA 干扰载体质粒载体结合了 miR30 结构特点与 shRNA 干扰技术,为基因沉默研究提供了一种高效且特异的工具。该载体构建时以 miR30 为骨架进行设计。在启动子方面,常采用具有广泛适用性的启动子如 CMV 启动子或 U6 启动子来驱动基于 miR30 结构改造的 shRNA 转录。miR30 - shRNA 的序列...
mir30结构干扰载体原理 载体构建。 科学家首先会构建能够干扰 miR-30 结构或功能的载体,一般是基于质粒或病毒(如慢病毒、腺病毒)等载体系统。在载体中,会包含特定的核酸序列,这些序列的设计是关键。 针对miR-30 的成熟序列或前体序列,设计与之互补的反义寡核苷酸序列,并将其整合到载体中。当载体进入细胞后,反义...
多个shRNA共表达:由于RNA聚合酶II可以启动较大的基因转录,多个shRNAmiRs可以作为多顺反子由单个启动子驱动表达。 与报告基因共表达:将报告基因与shRNAmiRs作为多顺反子一起共表达,实现shRNA的转录监测。 🔍未来展望 随着对miR-30 shRNA技术的深入探索,相信它将在基因功能研究、药物设计等领域发挥更大的作用!
shRNA一般由聚合酶III型启动子(如U6)来启动,无法满足我们对特定组织中基因调控的需求,根据miRNA的作用机制,科研人员研发了基于miRNA结构的shRNA干扰载体,其中shRNAmir30载体应用较为广泛,该载体保持了miRNA的loop环和双臂,模拟了体内miRNA实现RNAi的过程,可以更有效的对目的基因进行敲低,同时shRNAmir30载体由启动子聚...
慢病毒miR30 shRNA干扰载体系统是用于多种哺乳动物细胞中,高效干扰靶基因表达的方法。当病毒基因组被逆转录并永久整合到宿主细胞基因组时,用户定制的启动子会驱动包含目的基因和一个或多个基于miR30的靶向目的基因的shRNA(shRNAmiR)多顺反子的表达。 shRNAmiR转录物通过胞内micro-RNA途径加工产生成熟的shRNA,促进...
1.启动子广泛选择:与传统shRNA只能在Pol III类型启动子(U6或者H1启动子)下表达不同,miR30-shRNA可使用Pol II类型启动子表达,例如:常用的广泛表达启动子(CMV、EF1A、CAG等)、Tet-On诱导调控启动子TRE、组织特异性启动子等。 2.miR30 context序列优化:miR30 context序列经过优化。与native miR30 context序列相比...