表达shRNA常用的polⅢ型启动子有U6和H1，由于构建序列较短，shRNA能够轻易的插入病毒载体，但是想实现特定组织中的基因沉默，少不了组织特异性启动子的助力，然而U6和H1并不具有组织特异性。基于miRNA骨架的shRNA干扰载体，采用了pol II型启动子(包括多种组织特异性启动子)驱动，从而实现特定组织中的基因沉默。目前...
为了验证ACSL6在肿瘤免疫逃避中的作用，作者建立了肝癌小鼠，并注射靶向Acsl6基因的AAV8-miR30-shRNA（AAV8-shAcsl6）以敲低Acsl6的表达。结果发现在肝癌小鼠中注射AAV8-shAcsl6的可阻断肿瘤进展，肝脏重量、肝脏重量/体重比和肿瘤数量均下降，而过表达Acsl6的小鼠出现了大量的肿瘤负荷。Acsl6的下调促进了CD8+ T...
这一发现打开了使用前体miRNA二级结构作为生产siRNA骨架的大门，这种方法可以使shRNA以更自然的方式进行加工剪切（见图2），最大限度地减少不必要的副作用，而且插入miRNA骨架的shRNA序列更长，因此可由pol II型启动子（包括多种组织特异性启动子）驱动，从而实现特定组织中的基因沉默。
1) 启动子选择性多：基于miR-30的shRNA可以通过多种RNA聚合酶II启动子转录，包括广谱启动子（CMV、CAG和EF1a等）、组织特异性（hSyn、TBG和cTnT等）或诱导型启动子（四环素启动子TRE）。2) 实现多个shRNA共表达：由于RNA聚合酶II可以启动较大的基因转录，因此多个shRNAmiRs可以作为多顺反子由单个启动子驱动表达。
为了验证ACSL6在肿瘤免疫逃避中的作用,作者建立了肝癌小鼠,并注射靶向Acsl6基因的AAV8-miR30-shRNA(AAV8-shAcsl6)以敲低Acsl6的表达。结果发现在肝癌小鼠中注射AAV8-shAcsl6的可阻断肿瘤进展,肝脏重量、肝脏重量/体重比和肿瘤数量均下降,而过表达Acsl6的小鼠出现了大量的肿瘤负荷。Acsl6的下调促进了CD8+ T细胞...
miRNA先由RNA聚合酶II转录成初级miRNA,再被Drosha酶加工成前体miRNA,最后在胞浆中被Dicer酶剪切为成熟的miRNA。而shRNA则通过聚合酶III型启动子驱动,持续表达以实现基因沉默。 🎯基于miR-30的shRNA设计 设计时,我们选择合适的启动子,并保留miR-30的5'和3'flanking region序列,将靶点序列替换成熟区域的序列。设计...
组织特异性干扰神器—..shRNAmir30简介shRNA一般由聚合酶III型启动子(如U6)来启动,无法满足我们对特定组织中基因调控的需求,根据miRNA的作用机制,科研人员研发了基于miRNA结构的shRNA干扰载体,其
shRNA一般由聚合酶III型启动子(如U6)来启动,无法满足我们对特定组织中基因调控的需求,根据miRNA的作用机制,科研人员研发了基于miRNA结构的shRNA干扰载体,其中shRNAmir30载体应用较为广泛,该载体保持了miRNA的loop环和双臂,模拟了体内miRNA实现RNAi的过程,可以更有效的对目的基因进行敲低,同时shRNAmir30载体由启动子聚...
哺乳动物 miR30 - shRNA 干扰载体质粒载体结合了 miR30 结构特点与 shRNA 干扰技术,为基因沉默研究提供了一种高效且特异的工具。该载体构建时以 miR30 为骨架进行设计。在启动子方面,常采用具有广泛适用性的启动子如 CMV 启动子或 U6 启动子来驱动基于 miR30 结构改造的 shRNA 转录。miR30 - shRNA 的序列...
慢病毒miR30 shRNA干扰载体系统是用于多种哺乳动物细胞中,高效干扰靶基因表达的方法。当病毒基因组被逆转录并永久整合到宿主细胞基因组时,用户定制的启动子会驱动包含目的基因和一个或多个基于miR30的靶向目的基因的shRNA(shRNAmiR)多顺反子的表达。 shRNAmiR转录物通过胞内micro-RNA途径加工产生成熟的shRNA,促进...