表达shRNA常用的polⅢ型启动子有U6和H1，由于构建序列较短，shRNA能够轻易的插入病毒载体，但是想实现特定组织中的基因沉默，少不了组织特异性启动子的助力，然而U6和H1并不具有组织特异性。基于miRNA骨架的shRNA干扰载体，采用了pol II型启动子(包括多种组织特异性启动子)驱动，从而实现特定组织中的基因沉默。目前...
1) 启动子选择性多：基于miR-30的shRNA可以通过多种RNA聚合酶II启动子转录，包括广谱启动子（CMV、CAG和EF1a等）、组织特异性（hSyn、TBG和cTnT等）或诱导型启动子（四环素启动子TRE）。2) 实现多个shRNA共表达：由于RNA聚合酶II可以启动较大的基因转录，因此多个shRNAmiRs可以作为多顺反子由单个启动子驱动表达。
为了验证ACSL6在肿瘤免疫逃避中的作用，作者建立了肝癌小鼠，并注射靶向Acsl6基因的AAV8-miR30-shRNA（AAV8-shAcsl6）以敲低Acsl6的表达。结果发现在肝癌小鼠中注射AAV8-shAcsl6的可阻断肿瘤进展，肝脏重量、肝脏重量/体重比和肿瘤数量均下降，而过表达Acsl6的小鼠出现了大量的肿瘤负荷。Acsl6的下调促进了CD8+ T...
shRNA一般由聚合酶III型启动子(如U6)来启动,无法满足我们对特定组织中基因调控的需求,根据miRNA的作用机制,科研人员研发了基于miRNA结构的shRNA干扰载体,其中shRNAmir30载体应用较为广泛,该载体保持了miRNA的loop环和双臂,模拟了体内miRNA实现RNAi的过程,可以更有效的对目的基因进行敲低,同时shRNAmir30载体由启动子聚...
01基于miR30结构的shRNA介绍 首先，我们先简单了解下miRNA的成熟过程：初级miRNA（pri-miRNA）在核内被Drosha/ DGCR8复合物识别并加工成前体miRNA（pre-miRNA）pre-miRNA通过Exprotin-5复合物转运到细胞质中被Dicer酶剪切，最终形成成熟的双链miRNA miRNA和shRNA的成熟依赖于非常相似的细胞机制，只是miRNA多了一步核内...
为了验证ACSL6在肿瘤免疫逃避中的作用,作者建立了肝癌小鼠,并注射靶向Acsl6基因的AAV8-miR30-shRNA(AAV8-shAcsl6)以敲低Acsl6的表达。结果发现在肝癌小鼠中注射AAV8-shAcsl6的可阻断肿瘤进展,肝脏重量、肝脏重量/体重比和肿瘤数量均下降,而过表达Acsl6的小鼠出现了大量的肿瘤负荷。Acsl6的下调促进了CD8+ T细胞...
miRNA先由RNA聚合酶II转录成初级miRNA,再被Drosha酶加工成前体miRNA,最后在胞浆中被Dicer酶剪切为成熟的miRNA。而shRNA则通过聚合酶III型启动子驱动,持续表达以实现基因沉默。 🎯基于miR-30的shRNA设计 设计时,我们选择合适的启动子,并保留miR-30的5'和3'flanking region序列,将靶点序列替换成熟区域的序列。设计...
首先,多个shRNAmiR可以作为单个多顺反子进行转录,在细胞内加工成成熟的shRNA, 这使得单个转录物能同时干扰多个基因或靶向相同基因内的多个区域。 其次,在该载体系统中,用户定制的蛋白编码基因与shRNAmiR处于相同的多顺反子内,该ORF的表达可用于监测shRNA的转录(如果使用的是荧光/抗性标记)或可用于其他需要共表达...
RNA干扰 (RNAi)是一种进化上保守的转录后基因调控机制,它是由双链RNA(dsRNA)诱发同源mRNA高效特异性降解从而抑制基因表达的现象,是研究基因功能常用的手段之一。用于诱导持续的RNAi的手段,是用pol III型启动子表达shRNA,常用的pol III型启动子有U6和H1,由于构建序列较短,shRNA能够轻易地插入病毒载体,但是要想实现...
组织特异性干扰神器—..shRNAmir30简介shRNA一般由聚合酶III型启动子(如U6)来启动,无法满足我们对特定组织中基因调控的需求,根据miRNA的作用机制,科研人员研发了基于miRNA结构的shRNA干扰载体,其