shRNAmir-30在结构上高度类似shRNA,其设计原则可以参考shRNA,但需注意两点:1) 进行shRNAmir-30结构设计时一般选择22 bp的靶序列;2) 基于miR-30的shRNA在shRNA茎基部存在一个凸起,因此在进行正义链设计时,需作以下修改:碱基首位为C/G,则改为A;碱基首位为T/A,则改为C,使最终折叠的RNA中产生适当...
为设计shRNA 3’端的垂悬碱基,Loop部分的两个保守碱基对由CU/GG变为UA/UA 两侧引入了XhoI/EcoRI酶切位点,以便克隆 经过不断的优化和测试,形成了如今使用较为成熟的工具miR30结构。相信看到这里的小伙伴们对miR30结构有了更深入的了解,那么shRNA具体怎么构建到miR30骨架中的呢?具体构建方案为:将miR30的5...
miRNA先由RNA聚合酶II转录成初级miRNA,再被Drosha酶加工成前体miRNA,最后在胞浆中被Dicer酶剪切为成熟的miRNA。而shRNA则通过聚合酶III型启动子驱动,持续表达以实现基因沉默。 🎯基于miR-30的shRNA设计 设计时,我们选择合适的启动子,并保留miR-30的5'和3'flanking region序列,将靶点序列替换成熟区域的序列。设计...
哺乳动物 miR30 - shRNA 干扰载体质粒载体结合了 miR30 结构特点与 shRNA 干扰技术,为基因沉默研究提供了一种高效且特异的工具。该载体构建时以 miR30 为骨架进行设计。在启动子方面,常采用具有广泛适用性的启动子如 CMV 启动子或 U6 启动子来驱动基于 miR30 结构改造的 shRNA 转录。miR30 - shRNA 的序列...
为设计shRNA 3’端的垂悬碱基,Loop部分的两个保守碱基对由CU/GG变为UA/UA 两侧引入了XhoI/EcoRI酶切位点,以便克隆 经过不断的优化和测试,形成了如今使用较为成熟的工具miR30结构。相信看到这里的小伙伴们对miR30结构有了更深入的了解,那么shRNA具体怎么构建到miR30骨架中的呢?
在载体中,会包含特定的核酸序列,这些序列的设计是关键。 针对miR-30 的成熟序列或前体序列,设计与之互补的反义寡核苷酸序列,并将其整合到载体中。当载体进入细胞后,反义寡核苷酸可以与 miR-30 结合。也可以构建表达短发夹 RNA(shRNA)的载体,shRNA 进入细胞后会被加工成与 miR-30 互补的小干扰 RNA(siRNA) ,...
如题,mir30-shRNA载体,怎么设计那个正向反向序列啊?希望各位大牛指导指导。非常感谢。
为设计shRNA 3’端的垂悬碱基,Loop部分的两个保守碱基对由CU/GG变为UA/UA 两侧引入了XhoI/EcoRI酶切位点,以便克隆 经过不断的优化和测试,形成了如今使用较为成熟的工具miR30结构。相信看到这里的小伙伴们对miR30结构有了更深入的了解,那么shRNA具体怎么构建到miR30骨架中的呢?
旨在构建SGK3基因RNAi慢病毒表达载体,观察其对人乳腺癌细胞MB-474增殖和凋亡的影响.构建靶向SGK3的shRNA序列慢病毒载体,将其转染至人乳腺癌MB-474细胞以沉默SGK3基因,... 郭红艳,高涵,吴琦,... - 《生物技术通报》 被引量: 0发表: 2018年 加载更多来源...
为设计shRNA 3’端的垂悬碱基,Loop部分的两个保守碱基对由CU/GG变为UA/UA 两侧引入了XhoI/EcoRI酶切位点,以便克隆 经过不断的优化和测试,形成了如今使用较为成熟的工具miR30结构。相信看到这里的小伙伴们对miR30结构有了更深入的了解,那么shRNA具体怎么构建到miR30骨架中的呢? 具体构建方案为:将miR30的5'...