为设计shRNA 3’端的垂悬碱基，Loop部分的两个保守碱基对由CU/GG变为UA/UA 两侧引入了XhoI/EcoRI酶切位点，以便克隆 经过不断的优化和测试，形成了如今使用较为成熟的工具miR30结构。相信看到这里的小伙伴们对miR30结构有了更深入的了解，那么shRNA具体怎么构建到miR30骨架中的呢？具体构建方案为：将miR30的5...
shRNAmir-30在结构上高度类似shRNA，其设计原则可以参考shRNA，但需注意两点：1) 进行shRNAmir-30结构设计时一般选择22 bp的靶序列；2) 基于miR-30的shRNA在shRNA茎基部存在一个凸起，因此在进行正义链设计时，需作以下修改：碱基首位为C/G，则改为A；碱基首位为T/A，则改为C，使最终折叠的RNA中产生适当...
miRNA先由RNA聚合酶II转录成初级miRNA,再被Drosha酶加工成前体miRNA,最后在胞浆中被Dicer酶剪切为成熟的miRNA。而shRNA则通过聚合酶III型启动子驱动,持续表达以实现基因沉默。 🎯基于miR-30的shRNA设计 设计时,我们选择合适的启动子,并保留miR-30的5'和3'flanking region序列,将靶点序列替换成熟区域的序列。设计...
哺乳动物 miR30 - shRNA 干扰载体质粒载体结合了 miR30 结构特点与 shRNA 干扰技术,为基因沉默研究提供了一种高效且特异的工具。该载体构建时以 miR30 为骨架进行设计。在启动子方面,常采用具有广泛适用性的启动子如 CMV 启动子或 U6 启动子来驱动基于 miR30 结构改造的 shRNA 转录。miR30 - shRNA 的序列...
为设计shRNA 3’端的垂悬碱基,Loop部分的两个保守碱基对由CU/GG变为UA/UA 两侧引入了XhoI/EcoRI酶切位点,以便克隆 经过不断的优化和测试,形成了如今使用较为成熟的工具miR30结构。相信看到这里的小伙伴们对miR30结构有了更深入的了解,那么shRNA具体怎么构建到miR30骨架中的呢? 具体构建方案为:将miR30的5'...
为设计shRNA 3’端的垂悬碱基,Loop部分的两个保守碱基对由CU/GG变为UA/UA 两侧引入了XhoI/EcoRI酶切位点,以便克隆 经过不断的优化和测试,形成了如今使用较为成熟的工具miR30结构。相信看到这里的小伙伴们对miR30结构有了更深入的了解,那么shRNA具体怎么构建到miR30骨架中的呢?
方法:设计3条基于miR30骨 架的HPSE—shRNA,通过PCR获得目的片段,回收后与线性化LVPP.GFP载体连接产生重组慢病毒 载体LVPP—GFP/miR—HPSE—shRNA,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用 PP.GFP/miR.HPSE ·shRNA、pHelper1.0栽体和pHelper2.0栽体共转染包装细胞293T细胞,产生慢病毒,感染A375 细胞。以实时荧光定量PCR...
如题，mir30-shRNA载体，怎么设计那个正向反向序列啊？希望各位大牛指导指导。非常感谢。
在载体中,会包含特定的核酸序列,这些序列的设计是关键。 针对miR-30 的成熟序列或前体序列,设计与之互补的反义寡核苷酸序列,并将其整合到载体中。当载体进入细胞后,反义寡核苷酸可以与 miR-30 结合。也可以构建表达短发夹 RNA(shRNA)的载体,shRNA 进入细胞后会被加工成与 miR-30 互补的小干扰 RNA(siRNA) ,...
为设计shRNA 3’端的垂悬碱基,Loop部分的两个保守碱基对由CU/GG变为UA/UA 两侧引入了XhoI/EcoRI酶切位点,以便克隆 经过不断的优化和测试,形成了如今使用较为成熟的工具miR30结构。相信看到这里的小伙伴们对miR30结构有了更深入的了解,那么shRNA具体怎么构建到miR30骨架中的呢?