因此,在云序生物的GenSeq m6A MeRIP试剂盒中,我们贴心的为客户提供了IgG抗体以及m6A的一对阳参引物和一对阴参引物(根据文献报道:靶向 HEK293 细胞中 m6A 修饰的某段 RNA 区域(Positive Primers)和无 m6A 修饰的某段 RNA 区域(Negative Primers)),供有条件且感兴趣的用户验证实验效率和抗体特异性。但如前面所...
是真核生物mRNA最普遍存在的修饰。m6A主要富集在mRNA的启动子区、终止密码子区附近。RNA甲基化免疫共沉淀 (Methylated RNA Immunoprecipitation,MeRIP)基于m6A特异性抗体识别并结合mRNA上的m6A的原理,以RNA免疫共沉淀方法富集甲基化修饰片段为基础,并通过高通量测序及qPCR,在全转录组范围内研究发生m6A甲基化修饰的RNA区域。
因此,在云序生物的GenSeq m6A MeRIP试剂盒中,我们贴心的为客户提供了IgG抗体以及m6A的一对阳参引物和一对阴参引物(根据文献报道:靶向 HEK293 细胞中 m6A 修饰的某段 RNA 区域(Positive Primers)和无 m6A 修饰的某段 RNA 区域(Negative Primers)),供有条件且感兴趣的用户验证实验效率和抗体特异性。但如前面所...
5. 取2 μL RNA 样品作为 Input 样品-80℃保存备用; 6. 取分别取 20 μL RNA 样品作为m6A组及IGG组。 (三)免疫沉淀 1. m6A 组及IgG组分别中加入 4μg m6A 抗体及IgG抗体,置于垂直混匀器 4℃孵育过夜(16h)。 (四)protein A/G与抗体结合 1. 取出protein A/G 磁珠,并充分震荡混匀;m6A组及IgG...
m6A等RNA修饰的主要研究手段是通过MeRIP方法对发生修饰的片段进行富集,其后进行高通量测序分析修饰位点。而无论是一篇仅展示修饰位点分布特点的谱学文章,还是深入研究修饰调控基因表达机制的文章,在高通量测序这一步之后,通常都需要对筛选出来的部分修饰位点进行低通量的...
m6A等RNA修饰的主要研究手段是通过MeRIP方法对发生修饰的片段进行富集,其后进行高通量测序分析修饰位点。而无论是一篇仅展示修饰位点分布特点的谱学文章,还是深入研究修饰调控基因表达机制的文章,在高通量测序这一步之后,通常都需要对筛选出来的部分修饰位点进行低通量的MeRIP-qPCR验证。这个实验说来简单却必不可少,对于...
MeRIP-qPCR 是 m6A-IP-qPCR 的另一种说法。所以从名称上我 们就能发现,m6A-IP–qPCR 基本和常规的 RIP–qPCR 相似。当然在 讨论 RIP–qPCR 之前,我们先来看看常规的 RT-qPCR 是如何计算相对 表达量的。 关于RT-qPCR 的方法学论文很多,所以这里关于实验部分就不细 讲了。计算基因的绝对定量需要加入外参基因,...
用于 qPCR 的 RNA 一共分成 3 类,即 input、m6A-IP 和 IgG-IP,其中 input 占 m6A-IP 起始量约 10%。如果用数字来表示那就是 input 需要 100ng,m6A 在 IP 前需要 1ug,IgG 在 IP 前也需要 1ug。 meRIP-qPCR 知识解读(1) meRIP-qPCR 知识解读(2)...
m6A甲基化是真核生物mRNA最普遍的修饰，主要集中在启动子区和终止密码子附近。通过RNA甲基化免疫共沉淀（MeRIP）技术，结合特异性m6A抗体和RNA免疫沉淀方法，可以研究全转录组中发生m6A甲基化修饰的RNA区域。具体操作步骤如下：第一步：RNA提取。提取RNA样本，并存储于-80℃备用。第二步：RNA片段化。使用...
m6A RNA甲基化片段富集试剂盒(qPCR版) 简称:【MeRIP试剂盒】 此品非常适合从广泛的物种比如从哺乳类动物,植物,真菌和细菌,不仅如此,还包括培养细胞与新鲜和 冷冻的组织等感兴趣的样本中提取总RNA来富集片段化的含有m6A的RNA.少至500ng的总RNA也可开展. 整个实验时间不到3小时.手动操作不到30分钟. 目录号: A-...