💉 细胞裂解与蛋白溶解 由于LC3是脂化和膜相关蛋白,在细胞裂解时,可在冰上短暂超声,以促进蛋白溶解,使得LC3顺利从膜上解离。此外,LC3-II的分子量约16KD,LC3-I在电泳后停留在14KD处,两者均为小分子量蛋白,且差距仅2KD。因此在WB时要注意使用高浓度分离胶进行分离(建议约15%),转膜时使用小孔径0.2um的NC膜,...
1. LC3 I和LC3 II:LC3是一种在自噬过程中参与的蛋白质。它存在两种形式:LC3 I和LC3 II。LC3 I是未修饰的形式,而LC3 II是经过磷酸化和脂化修饰的形式。LC3 II在自噬过程中会转移到自噬体膜上,因此LC3 II的水平可以反映自噬的活性。 2. 免疫印迹法:常用的检测LC3的方法是免疫印迹法。首先,需要制备细胞提取...
LC3-I 和 LC3-II 是小分子蛋白 LC3-I 的分子量约 16 KD,由于 LC3-II 接合了 PE 基团,所以理论上,LC3-II 的分子量比 LC3-I 更高。但是,由于带负电的 PE 改变了 LC-II 的性质,使其疏水性更强,导致其在电泳中迁移率更高,所以,LC3-II 在电泳后,停留在了更小分子量(约 14 KD)处。 小分子量、LC...
LC3是自噬标志物,自噬形成时,胞浆型LC3(即LC3-I)会酶解掉一小段多肽,转变为(自噬体)膜型(即LC3-II),LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低。 pro-LC3;立刻C末端被ATG4水解切割掉一段多肽,暴露甘氨酸,这个是LC3-I,胞浆分布。自噬过程中,LC3-I在ATG7和ATG12-ATG5-ATG16L作用下(和泛素修饰过程很像),...
包括两种可相互转化的形式即LC3-I和LC3-II,参与了自噬体膜的形成。Atg4切割早期合成的pro-LC3暴露C端甘氨酸形成胞浆可溶形式的LC3-I。诱导自噬后,LC3-I在类E1酶Atg7、类E2酶Atg3以及类E3酶Atg5-Atg12-Atg16L复合物的共同作用下与自噬体膜表面的底物PE偶联,形成膜结合形式的LC3-II。LC3-II是自噬体的重要标志...
当LC3-I和LC3-II总量恒定时,LC3-II/LC3-I用来表示自噬的水平。其次,与LC3-II相比,LC3-I对反复冻融更加敏感,更容易降解,因此一般需要用新鲜制备样品上样。这点倒是有可能,之前制好的样本经过几次优化和反复冻融,有可能造成LC3-I检测不到。 师兄说:选择合适的一抗也很重...
在进行自噬研究时,提取蛋白进行 Western Blot 实验,检测 LC3-I 和 LC3-II 几乎是必做的实验,那么,进行 LC3 检测时,需要注意哪些要点呢?我们一一道来。 LC3: 从何处来?往何处去? LC3/Atg8 被具有蛋白内切酶活性的 Atg4 在羧基端剪切,生成胞质...
LC3-II水平的变化常被用来研究自噬的活性和程度。 三、LC3蛋白的表示方法 1. 免疫印迹法 免疫印迹法是最常用的检测蛋白表达水平的方法之一。研究人员通常通过免疫印迹法来检测细胞中LC3-I和LC3-II的水平变化,进而判断细胞的自噬活性。 2. 免疫荧光染色法 免疫荧光染色法是通过对细胞进行荧光标记,观察LC3蛋白在细胞...
LC3 的主要功能是参与自噬过程。自噬是一种重要的细胞生理过程，通过将细胞内的有害或老化的细胞器和蛋白质降解，从而维持细胞内环境的稳定性。LC3作为自噬过程中的关键调控因子，参与了自噬囊泡的形成和自噬相关膜的结合。在自噬过程中，LC3存在两种形式，即LC3-I和LC3-II。LC3-I是未修饰的形式，主要存在于胞浆中...