因此,在做半定量检测时,除了使用LC3-II/LC3-I的比值外,也可以配合使用LC3-II与管家蛋白的比值进行半定量。💉 细胞裂解与蛋白溶解 由于LC3是脂化和膜相关蛋白,在细胞裂解时,可在冰上短暂超声,以促进蛋白溶解,使得LC3顺利从膜上解离。此外,LC3-II的分子量约16KD,LC3-I在电泳后停留在14KD处,两者均为小分子量...
师兄不厌其烦的给我解释到:在自噬过程中,LC3-I逐渐转变为脂质化的LC3-II,当自噬的程度比较高时,LC3-I的量是较低的。当LC3-I和LC3-II总量恒定时,LC3-II/LC3-I用来表示自噬的水平。其次,与LC3-II相比,LC3-I对反复冻融更加敏感,更容易降解,因此一般需要用新鲜制备样品上...
自噬发生时，LC3 蛋白合成后立即在其羧基端被 Atg4 所剪切，产生细胞浆定位的 LC3-I。在自噬过程中，LC3-I 会被包括 Atg7 和 Atg3 在内的泛素样体系所修饰和加工，产生分子量为 14kD 的 LC3-II，并定位到自噬小体中。LC3-II 的含量和发生自噬的程度成正比，LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低。得益...
LC3-I 和 LC3-II 是小分子蛋白,虽然理论上LC3II分子量更大,由于带负电的PE改变了LC3II的性质,使其疏水性更强,导致其在电泳中迁移率更高。所以,LC3II电泳后停留在更小分子量(约14kDa)。 5.由于LC3-I 与 LC3-II 分子量小,又仅有 2 KD 差异,WB注意选用高浓度分离胶(约15%),转膜使用0.22μm转印膜,湿...
LC3是自噬标志物,自噬形成时,胞浆型LC3(即LC3-I)会酶解掉一小段多肽,转变为(自噬体)膜型(即LC3-II),LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低。pro-LC3;立刻C末端被ATG4水解切割掉一段多肽,暴露甘氨酸,这个是LC3-I,胞浆分布。自噬过程中,LC3-I在ATG7和A
自噬过程中,LC3-I在Atg7和Atg3作用下(和泛素修饰过程很像),与磷脂酰乙醇胺共价结合,LC3-I 被脂质化为 LC3-II,结合在自噬体膜上。LC3-Ⅱ常用作自噬形成的标识物,也是一种重要的定位于自噬胞膜上的多信号传导调节蛋白。LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的...
3、Western Blot检测LC3和p62蛋白的表达量 ① 利用Western Blot检测LC3-II/I比值的变化评价自噬形成(图8)。自噬形成时,胞浆型LC3-I会酶解掉一小段多肽,随后跟PE结合转变为膜型的LC3-II。因此可以通过LC3-II/I比值的大小估计自噬水平的高低。 图8. WB检测LC3、p62蛋白的表达(Yoshii, S.R. and N. Mizushima...
分析题图可知:LC3-II蛋白促使自噬体与溶酶体融合,完成损伤的线粒体降解,实验数据显示随运动强度增大,LC3-II的含量增加,据此分析作答。 『详解』A、自噬体可以与溶酶体融合,这依赖于膜的流动性,A正确; BC、据图可知,随运动强度加大,LC3-II/LC3-I的比值变大,因“LC3-II蛋白促使自噬体与溶酶体融合,完成损伤的...
利用Western Blot检测LC3-II/I比值的变化以评价细胞自噬形成。细胞自噬形成时,胞浆型LC3-I会酶解掉一小段多肽,随后跟PE结合转变为膜型的LC3-II。因此可以通过LC3-II/I比值的大小估计细胞自噬水平的高低。 图1. WB检测LC3和p62蛋白表达示意图 (Yoshii, S.R. and N. Mizushima. Int J Mol Sci, 2017.) ...