X–Gal是β–半乳糖苷酶(β–galactosidase)的底物,水解后呈蓝色。基于这个特点,pUC系列载体DNA(或其他带有lacZ基因载体DNA)以lacZ缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体载体DNA进行转染时,如果在平板培养基中加入X–Gal和IPTG,由于β–半乳糖苷酶的α–互补性,可以根据是否呈现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑选出...
蓝白斑筛选减轻了在筛选阳性克隆菌落时的工作量。 使用浓度: IPTG浓度:50mg/ml;X-gal浓度:20mg/ml 直接涂板法: 取IPTG溶液10l,X-gal溶液20l滴在培养基上,同时滴加50～100l无菌水或无菌LB,用涂布棒涂抹均匀,放至表面无水后即可使用。 预制板: 倒板时,在温度降至50℃后。每100mlLB中加入250l的IPTG溶液和...
1.首先将X-Gal制成20 mg / ml的二甲基甲酰胺（DMF）溶液（在-20°C下黑暗保存），然后将200μl的上述溶液和100μl的上述溶液添加到100 ml琼脂培养基IPTG中（24 mg / ml）和100μlAmp（100 mg / ml）制成X-Gal，IPTG，Amp平板培养基，将DNA片段插入pUC系列载体（或其他带有lacZ和Amp基因的载体）中，然...
X-Gal是β-半乳糖苷酶的底物，水解后呈蓝色。基于此功能，当以lacZ缺陷型细胞为宿主转化pUC系列载体DNA（或其他带有lacZ基因的载体DNA）时，或者当用X13 Gal和IPTG进行M13噬菌体载体DNA转染时，由于α β-半乳糖苷酶的互补性可以根据是否存在白色菌落（或噬菌斑）轻松选择基因重组体。
细菌蓝白斑筛选原理:IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质:5-溴-4-靛蓝,有色物质可使所在的菌落呈现蓝色。但当含有lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生...
X–Gal是β–半乳糖苷酶(β–galactosidase)的底物,水解后呈蓝色。基于这个特点,pUC系列载体DNA(或其他带有lacZ基因载体DNA)以lacZ缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体载体DNA进行转染时,如果在平板培养基中加入X–Gal和IPTG,由于β–半乳糖苷酶的α–互补性,可以根据是否呈现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑选出...
细菌蓝白斑筛选原理:IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质:5-溴-4-靛蓝,有色物质可使所在的菌落呈现蓝色。但当含有lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生...
X-Gal的作用机理及IPTG-X-gal片剂的生产方法实验注意事项 1.培养噬菌体时，在顶级琼脂中的添加量为：50μl/ 3 ml（20mg / ml）。2.含X-Gal的培养基应在4℃的黑暗环境中保存，必须在1-2周内使用。3.为便于实验操作，还可以根据细菌溶液的体积和板数来计算X-gal和IPTG储备溶液的浓度，并直接添加到准备...
实验方法原理 显色底物 X-gal 可与细菌培养物混合,与溶化的顶层琼脂混合后铺于选择性培养板。 实验材料 重组质粒转化的 E.coli 试剂、试剂盒 IPTG 溶液 X-gal 溶液 仪器、耗材 LB 或 YT 琼脂板 LB 或 YT 顶层琼脂 恒温块 木制牙签或接种环 实验步骤 一、材料1.
IPTG是为了诱导乳糖分解相关酶的编码基因表达，使得培养基中的乳糖得以被分解产生半乳糖。X-gal一种酵母半乳糖苷酶显色底物，可以与分解产生的半乳糖结合生成蓝色物质，用于蓝白斑筛选。