X–Gal是β–半乳糖苷酶(β–galactosidase)的底物,水解后呈蓝色。基于这个特点,pUC系列载体DNA(或其他带有lacZ基因载体DNA)以lacZ缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体载体DNA进行转染时,如果在平板培养基中加入X–Gal和IPTG,由于β–半乳糖苷酶的α–互补性,可以根据是否呈现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑
X–Gal是β–半乳糖苷酶（β–galactosidase）的底物，水解后呈蓝色。基于这个特点，pUC系列载体DNA（或其他带有lacZ基因载体DNA）以lacZ缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体载体DNA进行转染时，如果在平板培养基中加入X–Gal和IPTG，由于β–半乳糖苷酶的α–互补性，可以根据是否呈现白色菌落（或噬菌斑）而方便...
其原理是:pUC质粒含Ampr,可供菌落筛选,质粒载体带有大肠杆菌乳糖操纵子的lacZ’基因,该基因含一段编码β-半乳糖苷酶氨基末端145个氨基酸α-肽的DNA片断,IPTG可诱导此片断合成,此片断能与宿主细胞所编码的缺陷型β-半乳糖苷酶实现基因内α-互补,形成完整的β-半乳糖苷酶。该酶能催化无色底物X-gal生成半乳糖和深...
蓝白斑筛选减轻了在筛选阳性克隆菌落时的工作量。 使用浓度: IPTG浓度:50mg/ml;X-gal浓度:20mg/ml 直接涂板法: 取IPTG溶液10l,X-gal溶液20l滴在培养基上,同时滴加50～100l无菌水或无菌LB,用涂布棒涂抹均匀,放至表面无水后即可使用。 预制板: 倒板时,在温度降至50℃后。每100mlLB中加入250l的IPTG溶液和...
未插入时:1. 完整的LacZ基因可表达α肽;2. IPTG诱导乳糖操纵子,与宿主提供的ω肽组成完整酶;3. 可水解X-gal显蓝色,这类无外源插入的为阴性克隆验证:各步骤符合基因插入失活的显色原理,命题要素(标记基因、诱导剂、显色底物、显色结果)齐全,判断为完整命题...
X-Gal的作用机理及IPTG-X-gal片剂的生产方法实验注意事项 1.培养噬菌体时，在顶级琼脂中的添加量为：50μl/ 3 ml（20mg / ml）。2.含X-Gal的培养基应在4℃的黑暗环境中保存，必须在1-2周内使用。3.为便于实验操作，还可以根据细菌溶液的体积和板数来计算X-gal和IPTG储备溶液的浓度，并直接添加到准备...
实验方法原理 显色底物 X-gal 可与细菌培养物混合,与溶化的顶层琼脂混合后铺于选择性培养板。 实验材料 重组质粒转化的 E.coli 试剂、试剂盒 IPTG 溶液 X-gal 溶液 仪器、耗材 LB 或 YT 琼脂板 LB 或 YT 顶层琼脂 恒温块 木制牙签或接种环 实验步骤 一、材料1.
大肠杆菌的质粒上含有lacZ基因,其编码的产物β-半乳糖苷酶在X-gal和IPTG同时存在时,可以产生蓝色沉淀,使菌落呈现蓝色,否则菌落呈现白色。下图为利用该质粒进行的转基因过程,请据图回答下列相关问题: (1)图中切割目的基因时用到___种限制酶,而切割质粒时用到的限制酶是___。 (2)在基因工程的“四步曲”中,_...
细菌蓝白斑筛选原理:IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质:5-溴-4-靛蓝,有色物质可使所在的菌落呈现蓝色。但当含有lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生...
大肠杆菌的质粒上含有lacZ基因,其编码的产物β半乳糖苷酶在X-gal和IPTG同时存在时,可以产生蓝色沉淀,使菌落呈现蓝色,否则菌落呈现白色。如图为利用该质粒进行的转