为了排除非特异性结合的影响，我们需要引入IgG对照。通过将IgG与目标蛋白质一同进行共免疫沉淀，我们可以确定实验条件下非特异性结合的程度。通过对比目标蛋白质与IgG的共沉淀情况，我们可以准确判断目标蛋白质与其他蛋白质的特异性相互作用。六、IgG对照的作用 在co-ip-ms实验中，引入IgG对照可以起到以下几个作用：1....
一般不需要将IgG管拿去测序，因为阴性对照没必要进行测序。在ChIP-qPCR或ChIP-荧光定量PCR中需要设置IgG...
可能原因:抗体与非特异性蛋白交叉反应导致的假阳性;目的蛋白未被沉淀或裂解过程中被降解,导致假阴性。 解决方案:设置合理的对照。例如对于假阳性,可使用非特异性的IgG抗体作对照;对于假阴性,可充分裂解细胞,操作过程中使用蛋白酶抑制剂以防止蛋白降解等。 实验问题4:IP样本洗脱后未检测到目的蛋白: 可能原因:洗脱条件...
其中IgG是作为对照组的,但是在co-IP操作中向样品里加了IgG抗体,是进行过IP这个步骤的,因此将IgG对照组放在IP组下方。input的样品是没有经过IP这个步骤,因此单独列为一个泳道。比如在下面这个案例中,左图是input和IP组,IP组下方分为p65的IgG,意思是分别用p65抗体和IgG抗体进行IP。如果p65抗体是鼠源的,那么此时的...
1.IP实验需要设置Input组(阳性对照),IP实验组,IgG组(阴性对照)。 ●Input组:总蛋白量的5%-10% ●IP组:1:20-1:100(质量比) ●IgG组:IP抗体的同型对照(阴性对照) 举例:若用200 μg样品进行IP,Input组保留10-20 μg;IP组加入200 μg样品和5 μg IP抗体;IgG组加入200 μg样品和5 μg IgG。
IP/Co-IP实验中IgG阴性对照的意义是什么? 排除非特异性结合的可能性,例如检测一个兔子细胞的某种蛋白质,若没有设置IgG的对照,而操作中有非特异性蛋白质,又和设计的抗体有作用,就会出现阳性的结果。如果做...
IP一定要用IgG做对照吗 IP可以用IgG做对照,也可以用空载体质粒共转后做对照,哗姿段现在普遍认可的是用IgG做对照,准确性高册念而乱誉且操作也方便
IgG:用于做IP的阴性对照。 图3. IP实验结果参考示意图 根据标注含义分析,结果A和结果B是代表两种不同的结果。这两个结果的Input组都检测到了蛋白a和蛋白b,说明样本中含有这两种蛋白。结果A中,通过蛋白a的抗体进行IP可以靶向蛋白a的同时也沉淀下了蛋白b,表明蛋白a和蛋白b间存在相互作用。反之,结果B的IP样本中没...
实验组：加入anti-A的抗体………最后用Western检验B蛋白。对照组（阴性对照）：加入IgG………最后用West...
根据结果图信息，首先从最左边的一列可以知道该结果是探讨BRD9和FOXP1之间是否存在相互作用；并且二者都没有带标签，因此IB检测直接用针对目的蛋白的抗体；然后Input组为阳性对照，IgG为IP组的阴性对照，anti-FOXP1是IP的实验组，即表示分别用IgG和FOXP1的抗体进行WB检测蛋白复合物。结果显示，Iuput组中均检测到了B...