A:1、IP一抗与WB一抗来源一致或者两种抗体来源不一致时,二抗有交叉反应,使用IPkine二抗可以避免轻重链的干扰。2、靶蛋白丰度较低,仪器延长曝光时间,导致IgG阴性对照出现杂带:增加Input和IP泳道上样量,减少曝光时间,防止轻重链(杂带)的干扰;3、阴性对照IgG和IP一抗加入偏多:对照IgG抗体量较多,易导致杂带形成,阴...
Preimmune:阴性对照,IgG组 阴性对照是用来排出污染的可能性的。如果做了阴性对照,也就是 lgG 对照,对照没有出现阳性就说明没有非特异性的蛋白,对照出现阳性,说明抗体有非特异结合的可能,需要重新开始实验。 anti-TBP/TDF:实验组,IP组 4、 Co-IP 实验中如何去除重链轻链的影响? IP检测产生轻重链原因:靶标蛋白与...
实验组：加入anti-A的抗体………最后用Western检验B蛋白。对照组（阴性对照）：加入IgG………最后用West...
在Co-IP实验中，可以使用二抗筛选技术来进一步消除干扰，提高实验的特异性。5.对样本进行预处理：对样本进行适当的预处理（如去除杂质、浓缩蛋白等）可以提高实验的敏感性和准确性。6设置阴性对照：设置IgG阴性对照可以帮助识别非特异性结合和杂带干扰。如果阴性对照中出现阳性结果，说明抗体可能存在非特异性结合，需要重...
IP/Co-IP实验中IgG阴性对照的意义是什么? 排除非特异性结合的可能性,例如检测一个兔子细胞的某种蛋白质,若没有设置IgG的对照,而操作中有非特异性蛋白质,又和设计的抗体有作用,就会出现阳性的结果。如果做...
阴性对照的选择: 与IP抗体同源同型(亚型)的抗体:如 Rabbit IgG;Mouse IgG1, etc; 取与IP实验等量的裂解液,使用Isotype Control孵育;与IP抗体孵育同时进行。 Isotype Control选择: 预纯化的目的: 减少裂解混合物中的非特异性蛋白的含量。 同时减少了可能与Protein A/G发生交叉反应的蛋白含量。
在这个步骤中应该选择一定的阴性对照,如选用加同样量的IgG,另外可以更进一步,比如加入对细胞内其他无关蛋白的一抗作为对照。 抗体和珠子孵育后的洗涤 1 在抗体和珠子孵育的过程中会出现很多非特异性结合,而出现假阳性,那么去除这种非特异性结合最好的办法就是在抗体和...
其中IP组又分为IgG组(阴性对照组)和实验组,并通过WB去验证蛋白A和B在每一个组里面是否存在。 由Input组得到结论:蛋白A与蛋白B都是存在的,证明样本处理提取蛋白的步骤没有任何问题。这也提示:本实验一般是选取同一份细胞样品,提前取出部分做Input,其余均分为两份即IgG组(阴性对照组)和实验组。