GST pull down+GST IB组:表示GST pull down实验后用GST进行免疫印迹。发现三组均有条带,表明GST pull down实验体系可以正常发挥功能,也表明各组体系中含有GST相关的组分。 Input + YFP IB组:表示不经过GST pull down实验,直接对实验前各组的混合体系用YFP进行免疫印迹,是阳性对照组表明各组有YFP相关组分。 6、...
GST-pulldown操作说明 GST Pulldown(研究GST-CDC-48与Rpn11相互作用)1、取两只1.5mL EP管,标记为实验组和对照组,并向每支管中分别加入25μL GST-beeds 20%乙醇充分混合液。2、加入Wash buffer 1 洗涤两次,每次500μL,5000rpm,4℃离心30s去除上清液。Wash buffer 配比如下:Tris-HCL 50 mM NaCL 100...
🌟结果解读: 如果实验组检测到预期的互作蛋白,而对照组没有,说明GST融合蛋白和互作蛋白之间有特异性相互作用。注意:GST-pull down实验虽然简单、快速有效,但通常还需要共免疫沉淀(Co-IP)等实验来验证细胞内蛋白质相互作用是否真实存在🤗。0 0 发表评论 发表 作者最近动态 人力搬运工阿兰娜 2024-11-30 小蜗牛鲁...
input作为阳性对照,含有目的蛋白100%。实验组使用GST-Atrogin-1-wt,在严格控制反应蛋白量的情况下,可以观察到其作用的强弱。在这次实验中,通过GST pull down技术,可以有效地验证GST-Atrogin-1-wt和β-catenin之间的相互作用。具体来说,实验包括两部分,首先是通过考马斯亮蓝染色观察GST bead与GST蛋...
实验组中加入的是GST融合蛋白,对照组是GST蛋白,实验组和对照组都加入His融合蛋白,目的是证明GST标签不会和His融合蛋白有相互作用。 Pull down 通过GSH Beads 沉淀GST蛋白或GST融合蛋白,如果GST融合蛋白能够拉下His融合蛋白,而GST不能拉下His融合蛋白,则说明A蛋白和B蛋白有相互作用 都拉下来或者都拉不下来则不能说...
GST pull-down就是这么简单! GST pull-down就是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽琼脂糖磁珠上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,目的蛋白溶与之孵育,从而捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白),洗脱结合物通过SDS-PAGE电泳分离,最后经western blot或质谱分析,从而证实两种蛋白间的相互作用...
8.推荐使用5ul以上体积的GST-融合蛋白或GST对照蛋白进行pulldown系统分析。 第三部分:捕获、洗涤1.每5ul第二部分获取的GST-融合蛋白(或GST对照蛋白)加入20ul第一部分通过TNT®T7Quick转录/翻译反应制备的产物。 2.加入Magne GSTTM结合/洗涤缓冲液175ul,使其变成200ul反应体系。→Magne GSTTM结合/洗涤缓冲液是...
GST pull-down实验基于GST(glutathione-S-transferase),即谷胱甘肽-S-转移酶蛋白,可以与谷胱甘肽(Glutathione,GSH)结合,将GSH固定于磁珠上,形成GSH-磁珠,将已知蛋白X与GST融合表达,获得的GST-X蛋白可与GSH-磁珠结合,若体系中存在与X蛋白互做的蛋白Y,则会形成“磁珠-GSH-GST-X-Y”复合物,与X蛋白互做的蛋白即可...
GST pulldown实验流程图文详解。1️⃣ 蛋白的抽提与纯化原核表达蛋白分离纯化:(1)在裂解液上清中加入适量体积50%谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B,4℃摇床上缓慢摇动30~60min;(2)4℃,4000rpm离心5min,弃去上 - 蚂蚁好吃于20241014发布在抖音,已经收获了37个喜欢,来
GST pull down捕获诱饵蛋白及其互作蛋白(实验组、GST对照组、裂解液对照组) 诱饵蛋白Western blot检测图 pull down实验报告 LC-MS/MS检测及数据分析 质谱检测结果及报告 互作蛋白筛选表格 生物信息学分析结果和报告 GST pull-down * 样本要求 样本类型 GST pull down WB建议送样量 GST pull down MS建议送样量...