为了确定AIB1是否可以直接与NICD结合,将大肠杆菌产生的GST-NICD蛋白与基于大肠杆菌提取物的无细胞蛋白质合成系统产生的AIB1蛋白孵育,进行GST pull down检测是否直接互作。 结果表明,GST-NICD蛋白,而不是GST,能够下调AIB1(图C),表明AIB1可以直接与NICD结合。为了确定AIB1的哪些结构域可以与NICD结合,在293T细胞中表达...
为了确定AIB1是否可以直接与NICD结合,将大肠杆菌产生的GST-NICD蛋白与基于大肠杆菌提取物的无细胞蛋白质合成系统产生的AIB1蛋白孵育,进行GST pull down检测是否直接互作。 结果表明,GST-NICD蛋白,而不是GST,能够下调AIB1(图C),表明AIB1可以直接与NICD结合。为了确定AIB1的哪些结构域可以与NICD结合,在293T细胞中表达...
GST,全称为glutathione-S-transferase,即为谷胱甘肽-S-转移酶蛋白,可以与谷胱甘肽(glutathione,GSH)结合,其与CoIP实验都是验证蛋白互作的有效方法。 GST pull-down和与CoIP的区别GST pull-down:原核纯化蛋…
GST pull-down+GST IB组:表示GST pull-down实验后用GST进行免疫印迹。发现三组均有条带,表明GST pull-down实验体系可以正常发挥功能,也表明各组体系中含有GST相关的组分。 Input + YFP IB组:表示不经过GST pull-down实验,直接对实验前各组的混合体系用YFP进行免疫印迹,是阳性对照组表明各组有YFP相关组分。 文献...
缺点：GST Pull-down需要通过原核表达系统将诱饵蛋白纯化出来，再与目的蛋白溶液孵育，其无法像Co-IP一样模拟细胞内天然的互作环境；其次GST标签蛋白大小为26kDa，有些情况下可能会影响融合蛋白的空间结构。GST Pull-down 的注意事项1. 两种并不互作的DNA结合蛋白可能会因为DNA的存在而出现相互作用的假阳性结果，因此...
在这次实验中，通过GST pull down技术，可以有效地验证GST-Atrogin-1-wt和β-catenin之间的相互作用。具体来说，实验包括两部分，首先是通过考马斯亮蓝染色观察GST bead与GST蛋白或GST-Atrogin-1-wt的孵育效果，以及在孵育后的bead中拉取β-catenin。然后是免疫印迹技术，将相同胶上的蛋白通过转膜转移到...
GST pull down(GST融合蛋白沉降技术)是体外检测蛋白相互作用的常用方法,一般来说,GST融合蛋白pull down方法用于两个方面:一是鉴定能与已知融合蛋白相互作用的未知蛋白质;二是鉴定两个已知蛋白质之间是否存在相互作用。为排除假阳性所设...
▲ GST下拉实验（GST-pull down）技术原理示意图 GST下拉实验原理简介 GST-pull down 技术是一种在体外验证蛋白质相互作用的试验技术，可用来进一步验证酵母双杂交的结果。将靶蛋白与 GST（谷胱苷肽巯基转移酶, Glutathione-Stransferase）融合，使其与谷胱甘肽亲和树脂结合，然后在目的蛋白溶液过柱时，便可从中捕获与...
拉下实验（Pull-down）的缺点 1、两个非同一定位的蛋白可能因电荷或是强亲和力的原因造成假阳性，需用其他方法再次验证，例如Co-IP等；2、验证互作是在试管中进行的生化反应，不能够完全反映细胞内蛋白真实互作的状态；3、融合表达的GST标签，肽链较长，可能会改变原目的蛋白的原有的折叠结构。实验信息 实验过程中...