总结来说,Input 对照是指实验开始时未经过处理的样本,用来帮助确定实验过程中是否有非特异性的蛋白质或分子结合,从而作为实验结果的参考。 7. DNA pull-down实验中每个组分的作用 在DNA pull-down实验中,涉及的每个组分都有其特定作用,以下是各组分的简要说明: 生物素标记的DNA探针:作用:DNA探针通常是目标DNA序列...
A:DNA pull down-MS是体外研究蛋白-DNA是否有直接互作的经典技术,是将探针结合在凝胶/磁珠上,钓取与DNA探针有互作的蛋白;就技术而言,没有明显的缺陷;后续质谱能鉴定到多少蛋白取决于蛋白-DNA结合的强弱、蛋白的丰度等。 Q7: 做DNA pulldown 用DNA单链好还是双链好? A:常规的是用DNA双链作为探针。 Q8: 可以...
说明DNA-pull down MS技术为分析Glu-1表达的调控机制提供了大量可参考研究的基因，为改良小麦遗传育种提供了大量价值基因。二、实验方法 以小麦开花后10天的小麦种子为实验对象提取蛋白，以CCRM1-1为探针并使用生物素标签进行标记，进行DNApull-down，捕获的蛋白进行SDS-PAGE分离，酶解后利用LC-MS对结合探针的蛋白进行...
DNA pull-down是体外研究DNA与蛋白互作的有力工具。该技术将生物素标记的DNA片段结合在链霉亲和素磁珠上,再与细胞的核蛋白孵育,纯化出与DNA片段互作的蛋白,洗涤洗脱得到的蛋白产物,做western-blot检测特定蛋白是否与靶DNA片段结合;做质谱鉴定即可筛选出与DNA片段可能互作的蛋白信息(如具体某个或某些转录因子/组蛋白/...
GST Pull Down Pull down技术的基本原理是将一种蛋白质固定于某种基质上(如Sepharose),但细胞抽提液经过该基质时,可与该固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附,而没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。被吸附的蛋白可以通过改变洗脱液或...
GST pull down(GST融合蛋白沉降技术)是体外检测蛋白相互作用的常用方法,一般来说,GST融合蛋白pull down方法用于两个方面:一是鉴定能与已知融合蛋白相互作用的未知蛋白质;二是鉴定两个已知蛋白质之间是否存在相互作用。为排除假阳性所设的一组对照实验是在没有诱饵蛋白存在的条件下,将样品结合到GST上。该对照可以是表...
DNA pull-down WB (验证型) 制备DNA探针 探针电泳图 4-5周 实验样本 目标序列质粒模板 待测蛋白抗体 实验信息表 点击询价 Western blot检测待测样本中的待测蛋白 Western blot检测图 DNA pull down捕获目标DNA片段及其结合蛋白 待测蛋白Western blot检测图 DNA pull down实验报告 DNA pull-down MS (筛选型) ...
本文以案例为基础,详细介绍了DNA pull down实验的流程,包括实验所需的仪器试剂、实验方法及实验结果,仅供参考。 试剂和耗材样品: 采用PCR制备探针 引物序列:F:5' CTATCCGGCCCAAGCTTT 3'R:5' AATAATTCACCTTGGTGTAAC 3'(728 bp) PCR反应体系如下: ...
DNA pull-down是体外研究DNA与蛋白互作的有力工具。体外制备生物素标记的靶DNA系列,使其与待测蛋白液孵育,形成“生物素化DNA-蛋白质”复合物。由于生物素与链霉亲和素间的作用是目前已知强度最高的非共价作用之间,因此采用链霉亲和素磁珠将靶DNA及其结合蛋白从待测蛋白液
1 Control Pull-down溶液 Ovis aries 2 sample Pull-down溶液 Ovis aries (2)检测过程 略 (3)检测结果 样品名称 Control sample 差异蛋白 Protein Group 230 327 132 7、生物信息学分析 针对实验组扣除对照组后的132个差异蛋白进行生物信息学分析(GO、KEGG pathway、String)。 (1)GO分析 根据分类结果,对包含目...