首先PCR技术可以通过检测ctDNA中的突变基因进行癌症患者的筛选,让患者能够更加及时的发现肿瘤,从而得到更及时的治疗其次,PCR技术可以检测ctDNA中突变基因的类型和频率,为治疗提供更加精准的指导;第三,PCR技术可以用于监控ctDNA中突变基因中特定位点的变化,可帮助患者及时调整治疗方案,提供高治疗效果;第四,PCR技术可以通过...
二、ctDNA检测方法 1.数字PCR(digital PCR) 数字PCR是一种基于单分子计数的技术,通过将待测DNA模板分配到大量微小的反应体系中,实现对目标DNA的绝对定量。数字PCR具有较高的灵敏度和特异性,适用于ctDNA的检测。 2.实时荧光定量PCR(real-time PCR) 实时荧光定量PCR是一种基于荧光信号的累积与DNA扩增同步的检测技术...
(3)从血浆中提取游离DNA:将血浆放置于-80℃冻存直至DNA抽提,或直接进入DNA抽提步骤;由于ctDNA浓度低而且高度碎片化,富集和分离就显得尤为重要; (4)下游分析:由于正常cfDNA背景中ctDNA的比例很低,因此开发了专门的cfDNA分析方法,包括测序和基于聚合酶链式反应(PCR)分析的方法(BEAMing 和液滴数字PCR等)。 ctDNA的...
目前常用于分离ctDNA的方法有离心柱法和磁珠法。 1、离心柱法:原理是带负电的DNA骨架与带正电的硅胶滤膜之间有高亲和力。钠离子起到阳离子桥的作用,它可以吸引核酸磷酸骨架里带负电荷的氧。在高盐条件(pH≦7)下,钠离子可破坏水中的氢与硅中带负电荷的氧之间的氢键。通过多次漂洗去掉杂质后,用TE或灭菌水洗脱纯...
ctDNA检测方法 2.1 实时荧光定量PCR 实时荧光定量PCR(qPCR)是一种传统的ctDNA检测技术,已被广泛运用于医学检测相关领域[11]。Spindler等[12]利用qPCR定量分析了转移性结直肠癌患者在接受西妥昔单抗和伊立替康治疗期间血浆中cfDNA以及KRAS和BRAF突变的信息。该方法操作简便、数据分析比较容易,且检测费用低廉。但是该方...
ctDNA(circulating tumor DNA) 是肿瘤细胞释放到血液循环系统中的 DNA,是循环游离 DNA(circulating free DNA,cfDNA)或细胞游离DNA(cell free DNA,cfDNA)的一部分。ctDNA检测(液体活检)相对于常规传统侵入式实体组织活检具有非侵入性,患者依从性好,异质性低,可反复取材等优势。
1. 一种SNP检测新方法:四引物扩增受阻突变体系PCR技术2. Detection of epidermal growth factor receptor T790M mutation in plasma DNA from patients refractory to epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor3. Detection of extremely rare alleles by bidirectional pyrophosphorolysis-activated polymeri...
03、如何检测甲基化 用于ctDNA甲基化标记的分析方法主要包括三类(如图2): 1)基于抗体富集处理的方法:甲基化DNA免疫沉淀测序(MeDIP-seq); 甲基CpG结合域蛋白捕获测序法(MBD)等; 2)基于亚硫酸氢盐处理的方法:包括多种甲基化特异性PCR(MSP、RT-MSP、ddMSP),全基因组甲基化测序(WGBS);焦磷酸测序等; ...
癌症相关基因的基因突变是潜在候选基因,可以通过既定方法在癌症患者的血浆ctDNA中进行分析,panel测序有了更多突变检测的机会。但这种方法在癌症筛查中存在三个主要挑战:(1)对于早期癌症,可接受的放血量上限和有限的ctDNA脱落可能影响敏感性。(2)白细胞DNA污染和非恶性/癌前过程(如年龄相关的克隆造血)的血浆ctDNA的...
目前已有研究证实,ctDNA可能是CRC患者的重要预后因素 [10,11] ,因此合理的检测方法不仅能指导mCRC患者靶向药物个体化治疗,还可能推进全病程管理模式下的CRC患者预后分层及抗EGFR单抗治疗的优势人群筛查。 不同的检测方法,可能会因为灵敏度的差异或不同的突变截断值设定导致呈现不准确的突变检测结果,从而无法正确指导抗...