首先PCR技术可以通过检测ctDNA中的突变基因进行癌症患者的筛选,让患者能够更加及时的发现肿瘤,从而得到更及时的治疗其次,PCR技术可以检测ctDNA中突变基因的类型和频率,为治疗提供更加精准的指导;第三,PCR技术可以用于监控ctDNA中突变基因中特定位点的变化,可帮助患者及时调整治疗方案,提供高治疗效果;第四,PCR技术可以通过...
实时荧光定量PCR是一种基于荧光信号的累积与DNA扩增同步的检测技术。通过特异性引物和探针,实现对ctDNA的定量分析。实时荧光定量PCR具有操作简便、灵敏度高、特异性好等特点。 3.下调式PCR(downstream PCR) 下调式PCR是一种基于目标DNA与内参DNA比值的变化来评估肿瘤负荷的方法。该方法通过设计特异性引物,使目标DNA与...
(3)从血浆中提取游离DNA:将血浆放置于-80℃冻存直至DNA抽提,或直接进入DNA抽提步骤;由于ctDNA浓度低而且高度碎片化,富集和分离就显得尤为重要; (4)下游分析:由于正常cfDNA背景中ctDNA的比例很低,因此开发了专门的cfDNA分析方法,包括测序和基于聚合酶链式反应(PCR)分析的方法(BEAMing 和液滴数字PCR等)。 ctDNA的...
目前常用于分离ctDNA的方法有离心柱法和磁珠法。 1、离心柱法:原理是带负电的DNA骨架与带正电的硅胶滤膜之间有高亲和力。钠离子起到阳离子桥的作用,它可以吸引核酸磷酸骨架里带负电荷的氧。在高盐条件(pH≦7)下,钠离子可破坏水中的氢与硅中带负电荷的氧之间的氢键。通过多次漂洗去掉杂质后,用TE或灭菌水洗脱纯...
ctDNA检测方法 2.1 实时荧光定量PCR 实时荧光定量PCR(qPCR)是一种传统的ctDNA检测技术,已被广泛运用于医学检测相关领域[11]。Spindler等[12]利用qPCR定量分析了转移性结直肠癌患者在接受西妥昔单抗和伊立替康治疗期间血浆中cfDNA以及KRAS和BRAF突变的信息。该方法操作简便、数据分析比较容易,且检测费用低廉。但是该方...
ctDNA(circulating tumor DNA) 是肿瘤细胞释放到血液循环系统中的 DNA,是循环游离 DNA(circulating free DNA,cfDNA)或细胞游离DNA(cell free DNA,cfDNA)的一部分。ctDNA检测(液体活检)相对于常规传统侵入式实体组织活检具有非侵入性,患者依从性好,异质性低,可反复取材等优势。
而研究发现细胞游离肿瘤DNA (cell-free tumor DNA, ctDNA)的甲基化模式与它们起源的细胞或组织一致⁴,这也就意味着我们可以通过检测患者外周血中肿瘤特异性DNA甲基化畸变来进行癌症早期诊断和预后监测。 03、如何检测甲基化 用于ctDNA甲基化标记的分析方法主要包括三类(如图2):...
1. 一种SNP检测新方法:四引物扩增受阻突变体系PCR技术2. Detection of epidermal growth factor receptor T790M mutation in plasma DNA from patients refractory to epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor3. Detection of extremely rare alleles by bidirectional pyrophosphorolysis-activated polymeri...
癌症相关基因的基因突变是潜在候选基因,可以通过既定方法在癌症患者的血浆ctDNA中进行分析,panel测序有了更多突变检测的机会。但这种方法在癌症筛查中存在三个主要挑战:(1)对于早期癌症,可接受的放血量上限和有限的ctDNA脱落可能影响敏感性。(2)白细胞DNA污染和非恶性/癌前过程(如年龄相关的克隆造血)的血浆ctDNA的...
1.一种用于结直肠癌多基因ctDNA的检测方法,其特征在于:具体包括以下步骤:S1、收集有治疗前组织标本的KRAS、NRAS、PIK3CA、BRAF基因检测结果的mCRC患者若干例,分别包括若干例患者未接受过任何治疗,若干例患者接受了原发灶姑息性切除手术,若干例患者接受过一线以上化疗,肿瘤组织标本基因检测采用Amoy‑Dx试剂盒;S2、血液...