Fig. 1 我最爱gRNA啦~ 开展CRISPR 实验之前的重要考虑因素 锤子、竖锯和扳手都是很棒的工具,但没有“最好的”工具,你使用哪一种取决于你想做什么,在设计用于CRISPR 实验的 gRNA 时也是如此——“最佳”gRNA 在很大程度上取决于你要做什么:基因敲除、特定的碱基编辑或基因表达的调节。 Fig. 2 位置和序列是设...
基于CRISPR-gRNA文库筛选技术，研究人员对1893个转录因子(TF)进行全基因组筛选，寻找ONC后RGC存活和轴突再生的抑制因子，同时通过ATAC-seq和RNA-seq等分析损伤RGC的表观遗传和转录情况，确定了损伤响应性TF及其靶标。研究结果揭示了从轴突损伤转化为神经退行性疾病的核心转录程序，并提出了治疗神经退行性疾病的新策略。...
gRNA (或称向导 RNA)是 CRISPR-Cas9 系统的一部分。gRNA 分子有两个组分:一个靶点特异性 CRISPR RNA (crRNA) 和一个辅助性的反式激活 crRNA (tracrRNA)。gRNA 通过 20-mer crRNA 序列与靶基因组序列之间的碱基配对,引导Cas蛋白复合物对相应位点进行切割,决定编辑位点特异性。 什么是SgRNA? sgRNA 代表单向导 R...
研究结果揭示了从轴突损伤转化为神经退行性疾病的核心转录程序,并提出了治疗神经退行性疾病的新策略。 部分结果展示 1. CRISPR-gRNA文库筛选技术结合表观遗传分析筛选神经元存活和轴突再生的负调控TF 作者利用RIKEN和TFCat数据库汇总了1893个小鼠基因组中的TF,并针对每个TF基因不同区域,从CRISPR-Cas9敲除(GeCKO)文库中...
CRISPR-Cas9系统是目前最流行的基因组编辑技术,可以实现目的基因的敲除、插入和突变,该技术是一种由RNA指导Cas蛋白对靶基因定性修饰技术。CRISPR Cas9系统只需设计一个包含20个碱基对的RNA寡核苷酸,即可靶向任何基因组位点。gRNA是CRISPR Cas9系统的重要组成部分,在设计gRNA序列时需要考虑诸多因素。
基于CRISPR-gRNA文库筛选技术,研究人员对1893个转录因子(TF)进行全基因组筛选,寻找ONC后RGC存活和轴突再生的抑制因子,同时通过ATAC-seq和RNA-seq等分析损伤RGC的表观遗传和转录情况,确定了损伤响应性TF及其靶标。研究结果揭示了从轴突损伤转化为神经退行性疾病的核心转录程序,并提出了治疗神经退行性疾病的新策略。
在这些策略中,唯一进入临床试验的基于 CRISPR 技术的 SCD 疗法是 CTX001。CTX001由自体 CD34+造血干细胞和祖细胞(HSPCs)组成。在体外,使用 Cas9 和 gRNA 形成的核糖核蛋白(RNP)编辑 HSPCs,敲低红细胞特异性 BCL11A 增强子,诱导胎儿血红蛋白(HbF)表达。
gRNA设计流程: 1. 先在NCBI网站上查询并下载TP53基因组序列。 登录NCBI网址:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/ 2. 查询限定物种的目标基因 3. 搜索目标基因基本信息 4.下载P53基因基因组序列,复制目标编辑位点序列信息。 5. 登录张锋实验室的gRNA设计网站。最新网站地址:http://crispor.gi.ucsc.edu/ ...
| CRISPR-gRNA文库服务流程和优势 CRlSPR/Cas9是细菌和古生物菌用来抵抗外来入侵的一种获得性免疫系统。利用CRlSPR/Cas9技术建立的全基因组突变(基因敲除)库或者与某类功能相关的基因突变体(基因敲除)库,通过功能性筛选和富集以及随后的PCR扩增和深度测序(NGS)分析,筛选出与感兴趣的表型相关的基因的过程,被称为CRlS...
基于CRISPR-gRNA文库筛选技术,研究人员对1893个转录因子(TF)进行全基因组筛选,寻找ONC后RGC存活和轴突再生的抑制因子,同时通过ATAC-seq和RNA-seq等分析损伤RGC的表观遗传和转录情况,确定了损伤响应性TF及其靶标。研究结果揭示了从轴突损伤转...