CRISPR/Cas诊断工具，称为基于Cas12a蛋白的DNA内切酶靶向CRISPR反式报告基因(DETECTR)。DETECTR技术使用V型酶（如Cas12a）切割单链DNA序列，分为三个阶段：（1）将Cas12a蛋白和靶crRNA整合进DNA报告探针中，一旦crRNA通过Cas12a蛋白识别其靶序列，Cas12a蛋白就会在激活切割能力后，靶向切割单链或双链DNA；（2）靶DNA...
主要原因为:一、RNA激活的Cas13a会对胞内功能性RNA进行非特异性反式切割,可能对细胞造成伤害,而Cas12a虽然仅反式切割单链DNA,但能否被胞内RNA激活尚未明确;二、活细胞内条件无法达到最佳切割活性,包括Mg2+离子、报告基因浓度等,受限于复杂的胞内递送过程。因此,亟需开发新的CRISPR工具,以满足活细胞应用需求。 环境...
2024年8月,环境化学与生态毒理学国家重点实验室彭汉勇课题组与江桂斌院士、加拿大X. Chris Le院士等团队合作,在CRISPR基因编辑工具开发方向取得新进展,研究成果以“RNA-activated CRISPR/Cas12a nanorobots operating in living cells ”为...
在K562细胞中表达multiAsCas12a-KRAB的组合适应性筛选结果显示，与denAsCas12a-KRAB相比，multiAsCas12a-KRAB具有更高的细胞适应性评分，指示其性能更优且非特异性基因毒性更低。结果揭示了multiAsCas12a-KRAB在TSS周围有效地生成了CRISPRi活性的元基因谱，与dCas9-KRAB相似，且优于denAsCas12a-KRAB。尽管有些靶向...
CRISPR/Cas系统通常由CRISPR相关蛋白质(Cas)和CRISPR RNA(crRNA)组成,CRISPR/Cas是一种用来抵抗外来入侵的防御系统。该系统通过捕获噬菌体的入侵序列并将其插入到自己的序列中,以引导特定的蛋白质识别并将其降解。其中,CRISPR/Cas12a技术凭借RN...
crRNA和Cas12a形成RNP复合物,该复合物组装在AuNP支架上。(b)响应于200 pM miRNA,实时监测由CRISPR纳米机器产生的荧光。(c) 凝胶电泳表征30 nt底物及其被反式切割的产物。DNA和RNA分别用于激活溶液中的CRISPR纳米机器或游离的CRISPR RNP。(d)通过CRISPR纳米机器和溶液中的游离CRISPR RNP对底物反式切割产生的荧光。
首先,为测试Cas12a可识别的最小靶标长度,作者设计了不同长度的ssDNA靶标,结果表明,14nt是激活Cas12a反式切割活性的必需条件(图1 a-d)。其次,作者通过同时添加2个split ssDNA,它们分别与PAM近端(Pp)种子区和PAM远端(Pd)区的crRNA互补,发现当split ssDNA的组合长度大于或等于20 nt时,可以激活Cas12a的反式切割...
crRNA Cas12a endonuclease Variants Wild-type HiFi Nickases (H840A and D10A) Cas9-GFP (or RFP) Wild-type Ultra (improved performance) Cas9 crRNA:tracrRNA (option 1) crRNA Native: 42 nt Alt-R: 35–36 nt (36 nt recommended) tracrRNA Native: 89 nt Alt-R: 67 nt — Cas9 sgRNA (option...
c. 只需要crRNA与Cas12a蛋白的简单复合而不需要tracrRNA,且Cas12a的crRNA较短,一般在40-44nt左右(包含一个20nt的恒定区和一个20-24nt的特异性结合区域),更有利于化学合成。 Cas12a蛋白的应用 CRISPR/Cas诊断工具,称为基于Cas12a蛋白的DNA内切酶靶向CRISPR反式报告基因(DETECTR)。DETECTR技术使用V型酶(如Cas12a...
c. 只需要crRNA与Cas12a蛋白的简单复合而不需要tracrRNA,且Cas12a的crRNA较短,一般在40-44nt左右(包含一个20nt的恒定区和一个20-24nt的特异性结合区域),更有利于化学合成。 Cas12a蛋白的应用 CRISPR/Cas诊断工具,称为基于Cas12a蛋白的DNA内切酶靶向CRISPR反式报告基因(DETECTR)。DETECTR技术使用V型酶(如Cas12a...