若有条带,则说明存在交互;若无条带,则说明不存在交互。📌 在典型的COIP结果图中,input代表细胞裂解液,其中包含所有成分,因此用抗体检测时会有信号。IgG作为阴性对照,不会沉淀到目标蛋白。🔄 关键实验结果是:用目标蛋白A的抗体沉淀的样品中检测到B的存在(上半图),或用目标蛋白B的抗体沉淀的样品中检测到A的存...
Input:阳性对照组,组织细胞裂解液,在做 IP 实验之前,需要先跑 WB,确认样本中含有蛋白 A 和蛋白 B; IgG:阴性对照组,Anti-X 的同型对照抗体,如 Anti-X 是兔 IgG 型,则同型对照抗体需要选择 Rabbit IgG ; IP:实验组,免疫沉淀(immunoprecipitation),富集目的蛋白; Anti-X:X 蛋白的免疫共沉淀抗体; IB:免疫...
在coIP-WB鉴定结果中,IgG组无目的蛋白条带、IP组有目的蛋白条带,说明IP过程成功;银染胶图中,IP组相对于IgG组有更多蛋白条带、且存在差异,说明coIP过程捕获到互作蛋白;IP产物在质谱检测中鉴定到的蛋白数量不能作为判断实验成败的标准,因为这取决于目的蛋白本身所...
非特异性条带要分情况分析，如果是input和IP组、IgG组都有杂带，可能是磁珠的非特异性结合，样本上样量过高、或者抗体浓度过高造成的非特异性结合，建议实验前对磁珠进行漂洗，实验过程中增加洗涤次数，使用合适的样品和抗体浓度。如果IgG组和IP组无杂带，Input有杂带，可能由于WB抗体的特异性不够好，实际实验中可...
在coIP-WB鉴定结果中,IgG组无目的蛋白条带、IP组有目的蛋白条带,说明IP过程成功;银染胶图中,IP组相对于IgG组有更多蛋白条带、且存在差异,说明coIP过程捕获到互作蛋白;IP产物在质谱检测中鉴定到的蛋白数量不能作为判断实验成败的标准,因为这取决于目的蛋白本身所具有的互作蛋白数量、结合力强弱等方面;IP产物的质谱鉴...
非特异性条带要分情况分析,如果是input和IP组、IgG组都有杂带,可能是磁珠的非特异性结合,样本上样量过高、或者抗体浓度过高造成的非特异性结合,建议实验前对磁珠进行漂洗,实验过程中增加洗涤次数,使用合适的样品和抗体浓度。如果IgG组和IP组无杂带,Input有杂带,可能由于WB抗体的特异性不够好,实际实验中可能考虑的...
coIP-WB鉴定结果IgG组无目的蛋白条带、IP组有目的蛋白条带,说明IP过程成功,此时质谱极低概率会在IgG组中鉴定到目的条带,如果遇到这种情况可能是在切胶及质谱样品处理过程中发生了串染,对IP组中互作蛋白的结论没有影响,IgG组中的蛋白在文章中通常都不是考察对象。
非特异性条带要分情况分析,如果是input和IP组、IgG组都有杂带,可能是磁珠的非特异性结合,样本上样量过高、或者抗体浓度过高造成的非特异性结合,建议实验前对磁珠进行漂洗,实验过程中增加洗涤次数,使用合适的样品和抗体浓度。如果IgG组和IP组无杂带,Input有杂带,可能由于WB抗体的特异性不够好,实际实验中可能考虑的...
由Input组的条带可以得到结论:蛋白A与蛋白B都是存在的,证明样本处理提取蛋白的步骤没有任何问题。阴性对照IgG组和实验组平行进行免疫沉淀实验,结果蛋白A与蛋白B均没有条带,说明利用IgG抗体没有把蛋白A和B沉淀下来,证明蛋白A和B与IgG没有结合,排除了蛋白与抗体非特异性结合的可能性;而实验组蛋白A和B均有条带,...
问题:请问跑出来 IgG 泳道有和 IP 组一样目的条带大小的条带,且不是轻链重链的大小处,是什么原因呢?背景也很干净,没有杂带。 回答:通常 IgG 对照是不能特异性结合目标蛋白的,如果出现条带了,要考虑同型对照或者琼脂糖珠/磁珠本身对蛋白的...