本实验一共分为两大组：Input组及IP组，其中IP组又分为IgG组（阴性对照组）和实验组，并通过WB去验证蛋白A和B在每一个组里面是否存在。由Input组的条带可以得到结论：蛋白A与蛋白B都是存在的，证明样本处理提取蛋白的步骤没有任何问题。阴性对照IgG组和实验组平行进行免疫沉淀实验，结果蛋白A与蛋白B均没有条带...
可能由于目标蛋白在样本中的丰度较低或存在降解现象，这导致在Input组中未能成功检测到该蛋白，而在IP组经过富集后能够检测到。建议适当提高Input组的上样量，进行常规的WB验证，并在样本处理阶段添加蛋白酶抑制剂以稳定蛋白质。3、杂带问题 非特异性条带要分情况分析，如果是input和IP组、IgG组都有杂带，可能是磁...
本实验一共分为两大组:Input组及IP组,其中IP组又分为IgG组(阴性对照组)和实验组,并通过WB去验证蛋白A和B在每一个组里面是否存在。由Input组的条带可以得到结论:蛋白A与蛋白B都是存在的,证明样本处理提取蛋白的步骤没有任何问题。阴性对照IgG组和实验组平行进行免疫沉淀实验,结果蛋白A与蛋白B均没有条带,说明...
可能由于目标蛋白在样本中的丰度较低或存在降解现象,这导致在Input组中未能成功检测到该蛋白,而在IP组经过富集后能够检测到。建议适当提高Input组的上样量,进行常规的WB验证,并在样本处理阶段添加蛋白酶抑制剂以稳定蛋白质。 3、杂带问题 非特异性条带要分情况分析,如果是input和IP组、IgG组都有杂带,可能是磁珠...
本实验一共分为两大组:Input组及IP组,其中IP组又分为IgG组(阴性对照组)和实验组,并通过WB去验证蛋白A和B在每一个组里面是否存在。由Input组的条带可以得到结论:蛋白A与蛋白B都是存在的,证明样本处理提取蛋白的步骤没有任何问题。阴性对照IgG组和实验组平行进行免疫沉淀实验,结果蛋白A与蛋白B均没有条带,说明...
分份:离心的上清液分成三份,每份40ul加5×loading buffer,95°变性10分钟,-20°保存备用,这就是Input组。剩下的上清液分成两份,一份为IgG组,一份为IP组,每组加裂解液补足至1ml。 拉蛋白:如果用A蛋白的抗体去拉,接下来,在IP组的管子里加2ugA的一抗(一般为4-5ul),在IgG组的管子里加和A同种属来源的IgG蛋...
由图可以发现,该实验被分为两组:input组及IP组,有两块胶图,第一块是IB验证蛋白X的存在,第二块是IB验证蛋白Y的存在。由对照组的条带可以得到结论:蛋白X与蛋白Y都是存在的。IP组的第一个条带表示利用IgG进行沉淀实验,结果蛋白X与蛋白Y没有被沉淀下来,说明蛋白X、蛋白Y不能与IgG结合(阴性对照,用于排除蛋白...
📌 在典型的COIP结果图中,input代表细胞裂解液,其中包含所有成分,因此用抗体检测时会有信号。IgG作为阴性对照,不会沉淀到目标蛋白。🔄 关键实验结果是:用目标蛋白A的抗体沉淀的样品中检测到B的存在(上半图),或用目标蛋白B的抗体沉淀的样品中检测到A的存在(下半图)。红色箭头标注的组别有条带,即说明A和B...
为证明实验结果的真实性和可靠性,在 CoIP-WB实验中一般需设置以下5 个实验对照组。 Input:阳性对照组,组织细胞裂解液,在做 IP 实验之前,需要先跑 WB,确认样本中含有蛋白 A 和蛋白 B; IgG:阴性对照组,Anti-X 的同型对照抗体,如 Anti-X 是兔 IgG 型,则同型对照抗体需要选择 Rabbit IgG ; ...
本实验一共分为两大组:Input部分及IP部分。 其中IP组又分为IgG组(阴性对照组)和实验组,并通过WB去验证蛋白A和B在每一个组里面是否存在。 由Input组得到结论:蛋白A与蛋白B都是存在的,证明样本处理提取蛋白的步骤没有任何问题。这也提示:本实验一般是选取同一份细胞样品,提前取出部分做Input,其余均分为两份即Ig...