在分子生物学研究中,聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)是一项基础且关键的技术,广泛应用于DNA克隆、基因表达分析、病原体检测等多个领域。引物作为PCR反应的核心组成部分,其设计质量直接影响到实验的成败。本文将详细介绍常规PCR、实时荧光定量PCR(qPCR)、实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)以及C
这时,如果一定要做阳性对照,还可以采用另一个方案,使用阳性抗体histone H3抗体配合靶基因的特异性引物来做PCR,因为任何靶基因都有组蛋白的结合,所以histone H3抗体免疫沉淀下来的DNA用靶基因引物做PCR也肯定会产生阳性信号。 特别提醒: ChIP-qPCR和普通逆转录-qPCR的引物设计有很大不同。 普通逆转录 qPCR引物设计里一...
从上图我们知道,这个引物可以扩增出很多产物。这个不重要,因为我们在收取组织或者细胞做chip的时候,是要将dna和蛋白质复合物进行超声,将dna打断的,所以我们只要打断dna再跑胶明确那些dna主要是500以下就行。这样,我们的引物就是非常特异了。那么,这一条引...
引物设计Tips 1. TF结合的区域通常是启动子,UTR这些A/T比例比较高的区域,因而如果设计出来的引物Tm值略低,也是正常的,只要可以保证引物的特异性,不必强求退火温度比Tm低5度。 2. qPCR的产物长度一般不要太长,80-150bp就可以,因为在ChIP实验中染色质被片段化,你的PCR扩增的片段越长,这段DNA被打断的可能性就...
引物设计Tips 1. TF结合的区域通常是启动子,UTR这些A/T比例比较高的区域,因而如果设计出来的引物Tm值略低,也是正常的,只要可以保证引物的特异性,不必强求退火温度比Tm低5度。 2. qPCR的产物长度一般不要太长,80-150bp就可以,因为在ChIP实验中染色质被片段化,你的PCR扩增的片段越长,这段DNA被打断的可能性就...
2、PCR的阴性引物对照：选做 考虑目的蛋白抗体与DNA的非特异性结合的可能，所以通常还会选择数对阴性引物，即目的蛋白肯定不会结合的DNA序列，作为该抗体的阴性对照。3、PCR的阳性引物对照：选做 4、Spike-in参照：选做 什么是ChIP spike-in？ChIP Spike-in指的是在一个ChIP实验中，在纯化富集得到的目的DNA片段...
还可以根据靶序列设计引物,用半定量PCR的方法进行测定,或采用Real-time PCR方法进行定量分析。如果目的蛋白的靶序列是未知的或高通量的(high-throughput),可采用Southern杂交。但因为免疫沉淀的DNA量较少,所以在研究时通常要用PCR方法扩增...
赛默飞提供ChIP-ready DNA定量PCR分析技术指南,包括引物设计要求,帮助您获得高质量的ChIP数据。引物长度应为20-30个碱基,Tm值在55-60℃之间。
· 实验数据的分析需考虑到实验的技术变异，包括PCR扩增效率的变异和样本处理过程中的损失。因此，实验设计中包含重复实验以及适当的负对照是必要的。· ChIP实验的结果可以直接应用于基因表达调控的研究，如分析特定转录因子在不同生物学条件下的DNA结合位点变化，揭示其在生理或疾病状态下的功能角色。· 此外，ChIP-...
引物对照的存在,确保了实验结果不受非特异性结合的影响。 抗体对照 💉 抗体对照在ChIP-qPCR实验中同样至关重要。由于实验的结论准确性高度依赖于抗体的特异性结合效果,因此设计包含阴性抗体对照组的实验显得尤为重要。通过比较实验组和对照组的PCR结果,我们可以排除非特异性结合的干扰,从而提高实验的可靠性。