采用CRISPR/Cas9 基因编辑技术可将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因定点插入到受精卵的Y染色体上,获得转基因雄性小鼠。该转基因小鼠与野生型雌性小鼠交配,通过观察荧光可确定早期胚胎的性别。下列操作错误的是( ) A. 通过观察早期胚胎的荧光,能发出绿色荧光的即为雄性小鼠胚胎 B. 分离能表达EGFP的胚胎干细胞,通过核移植...
NLS-Cas9-EGFP在Cas9核酸酶的基础上进行改造,它在N端包含一个核定位信号(NLS),在C端包含一个EGFP和一个6X (His)序列。当Cas9以NLS序列表达时,Cas9 RNP复合物在进入细胞后立即定位到细胞核。不需要体内转录或翻译,提高了效率。此外,与其他系统相比,EGFP标签可作为追踪或分类转染细胞的报告器,通过荧光激活细胞分选...
一般情况下，CRISPR-Cas9靶向“out-of-frame” EGFP序列后能够使EGFP激活。一旦发现抑制剂，上述过程将会被阻断，EGFP表达受阻，细胞不会发出绿色荧光。首轮筛选发现了多个携带迈克尔受体的化合物对CRISPR-Cas9显示出抑制性。以此为基础，作者对含类似结构的已上市或处于研究阶段的化合物进行二轮筛选，发现一系列具有CRISPR...
编码基因中的KruppelAssociation Boxes(KRAB)结构域具有转录抑制作用,人类基因组中大约有350个编码蛋白的基因含有该结构域。Gilbert将dCas9蛋白与KRAB结构域融合,构建dCas9-KRAB融合蛋白,该融合蛋白可以在sgRNA的指导下特异性地靶向EGFP载体以降低荧光活性(Gilbert Luke A et al.,2013)。研究表明dCas9-KRAB通过将甲基转...
Cas9-NLS-EGFP蛋白是大肠杆菌重组表达的来自Streptococcus pyogenes的野生型Cas9蛋白。蛋白N端添加了NLS信号肽,蛋白C端加了EGFP荧光标签。Cas9-NLS-EGFP蛋白高度纯化,可以用于体外切割,也可用于细胞基因编辑。该蛋白具有Cas9蛋白的全部活性,同时可以通过荧光筛选转染成功的细胞。 Cas9-NLS-EGFP可以在体外与gRNA稳定结合,将...
NLS-Cas9-EGFP Nuclease 产品货号 产品规格 目录价 数量 11364ES50 50 μg 1595.00 11364ES60 100 μg 2815.00 11364ES76 500 μg 11265.00 批量采购,请点击询价 下载产品说明书 产品说明书 FAQ COA 已发表文献 Cas9核酸酶是一种向导RNA(guideRNA, gRNA)引导的核酸内切酶,可催化双链DNA的裂解。NLS-Cas9-EGFP...
通过共转染含有eGFP报告基因的双链DNA模板和Cas9_gRNA #2质粒，尝试基因编辑，但流式细胞术检测显示敲入效率较低（GFP阳性细胞不足1%）。利用FACS富集了正确编辑的细胞，并经DNA序列分析确认了eGFP标签在内源性HBG1基因中的准确插入。为了提高敲入效率，研究人员在HUDEP2细胞中采用单链DNA模板和改进的Cas9-gRNA递送...
Gilbert将dCas9蛋白与KRAB结构域融合,构建dCas9-KRAB融合蛋白,该融合蛋白可以在sgRNA的指导下特异性地靶向EGFP载体以降低荧光活性(Gilbert Luke A et al.,2013)。研究表明dCas9-KRAB通过将甲基转移酶SETDB1招募到靶点来对靶基因进行甲基化修饰从而抑制靶基因的表达。dcas9-KRAB还可以靶向基因调控元件,例如,dCas9-...
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