Cas9-NLS-EGFP蛋白是大肠杆菌重组表达的来自Streptococcus pyogenes的野生型Cas9蛋白。蛋白N端添加了NLS信号肽,蛋白C端加了EGFP荧光标签。Cas9-NLS-EGFP蛋白高度纯化,可以用于体外切割,也可用于细胞基因编辑。该蛋白具有Cas9蛋白的全部活性,同时可以通过荧光筛选转染成功的细胞。 Cas9-NLS-EGFP可以在体外与gRNA稳定结合,将...
Gilbert将dCas9蛋白与KRAB结构域融合,构建dCas9-KRAB融合蛋白,该融合蛋白可以在sgRNA的指导下特异性地靶向EGFP载体以降低荧光活性(Gilbert Luke A et al.,2013)。研究表明dCas9-KRAB通过将甲基转移酶SETDB1招募到靶点来对靶基因进行甲基化修饰从而抑制靶基因的表达。dcas9-KRAB还可以靶向基因调控元件,例如,dCas9-KRA...
Gilbert将dCas9蛋白与KRAB结构域融合,构建dCas9-KRAB融合蛋白,该融合蛋白可以在sgRNA的指导下特异性地靶向EGFP载体以降低荧光活性(Gilbert Luke A et al.,2013)。研究表明dCas9-KRAB通过将甲基转移酶SETDB1招募到靶点来对靶基因进行甲基化修饰从而抑制靶基因的表达。dcas9-KRAB还可以靶向基因调控元件,例如,dCas9-KRA...
Gilbert将dCas9蛋白与KRAB结构域融合,构建dCas9-KRAB融合蛋白,该融合蛋白可以在sgRNA的指导下特异性地靶向EGFP载体以降低荧光活性(Gilbert Luke A et al.,2013)。研究表明dCas9-KRAB通过将甲基转移酶SETDB1招募到靶点来对靶基因进行甲基化修饰从而抑制靶基因的表达。dcas9-KRAB还可以靶向基因调控元件,例如,dCas9-KRA...
高切割效率:NLS 确保 Cas9 蛋白高效进入细胞核 ; 低脱靶效应:Cas9 核酸酶的瞬时表达提高了切割的特异性; 节省时间:无需转录和翻译; 减少劳动力:通过基于EGFP的FACS富集细胞群以进行所需的基因组编辑。C端His标签增加了融合蛋白检测方法的选择。 可应用于: ...
编码基因中的KruppelAssociation Boxes(KRAB)结构域具有转录抑制作用,人类基因组中大约有350个编码蛋白的基因含有该结构域。Gilbert将dCas9蛋白与KRAB结构域融合,构建dCas9-KRAB融合蛋白,该融合蛋白可以在sgRNA的指导下特异性地靶向EGFP载体以降低荧光活性(Gilbert Luke A et al.,2013)。研究表明dCas9-KRAB通过将甲基转...
我们的目标基因是EGFP,这是一种能够发出绿色荧光的蛋白的基因。我们在Cas9突变体库的质粒上,加入了一个叫做sgRNA表达盒的东西,这个东西可以让细菌产生一种和EGFP基因完全匹配的sgRNA分子。这样,当我们把这个质粒放到细菌里时,细菌就会同时产生Cas9突变体和sgRNA分子,这两个分子就会结合在一起,形成一个能够识别并切割...
NLS-Cas9核酸酶(EGFP标记) 英文名称: NLS-Cas9-EGFP Nuclease 产品规格: 50μg 发货周期: 1～3天 产品价格: 询价 纯蛋白体系,避免CRISPR基因敲除时引入质粒或病毒干扰; 蛋白带有EGFP标记,更易进行转染效率判断和细胞富集; 可显著降低脱靶效应。 基于蛋白与sgRNA转染的非病毒载体CRISPR基因敲除; ...
利用FACS富集了正确编辑的细胞，并经DNA序列分析确认了eGFP标签在内源性HBG1基因中的准确插入。为了提高敲入效率，研究人员在HUDEP2细胞中采用单链DNA模板和改进的Cas9-gRNA递送策略（使用RNP），将HiBiT标签引入Aγ-球蛋白C末端，使敲入效率提升至20%以上。蛋白免疫印迹分析和HiBiT发光信号检测证实了标签的特异性。通...
为了验证嗜热AtCas9在哺乳动物细胞中是否有活性，研究者对AtCas9进行一系列改进，在EGFP位点中达到60%的切割效率。利用GUIDE-Seq检测AtCas9的脱靶效应，发现AtCas9的脱靶事件远低于SpRY（一种近乎无PAM的SpCas9变体）。考虑到 PAM 选择对碱基编辑器的高度限制，作者进一步探索了AtCas9在碱基编辑中的应用。AtCas9-BE3...